[发明专利]连接蛋白半通道的特异性调节剂

权利要求书

1.一种鉴定连接蛋白半通道的特异性抑制化合物的方法，其中，所述方法包括：

a)分析所述连接蛋白的结构作为参考；

b)生成连接蛋白的对比模型；

c)进行模拟筛选以便鉴定由连接蛋白形成的半通道的调节剂；

d)评估所述化合物调节通过细胞的细胞膜运输的能力，作为抑制化合物的参考，所述的细胞的半通道表达缺陷并用不同连接蛋白转染；

e)根据它们对所述半通道的作用，对抑制由连接蛋白形成的所述半通道的所述分子进行分类。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述参考的连接蛋白对应于连接蛋白26和/或43。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(a)中所述参考的连接蛋白为人类连接蛋白26。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(b)中所述对比模型基于结构域中的相互作用能量的评估，所述结构域阻止构像改变以便产生所述由连接蛋白形成的半通道的开启/激活。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，在被半通道中的N-端螺旋(NTH)和连接蛋白原体的α-螺旋1和2的跨膜片段以及另一个原体的α-螺旋1的跨膜片段所限定的结构域中，评估相互作用能量。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(c)中，采用所述参考的连接蛋白组成的半通道的结构和半通道模型进行模拟筛选，所述半通道模型是采用参考连接蛋白结构作为样式比较建模，由比较连接蛋白形成的。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤(c)中所述比较连接蛋白为连接蛋白43。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤(c)中，所述模拟筛选采用的配体是针对对应于连接蛋白26、43或其它连接蛋白的半通道的蛋白的晶体结构或对比模型。

9.根据权利要求8所述的方法，在受残基限制的结合位点评估化合物的相互作用能量，所述残基对应于连接蛋白26中原体的残基3-10(NTH)、29-40(TM1)、74-93(TM2)的片段和邻近原体的残基29-40(TM1)或者其它连接蛋白中的等同残基。

10.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中所述参考抑制剂为β甘草次酸(BGA)、生胃酮(CBX)或它们的混合物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中，所述评价采用在不含二价阳离子的胞外培养基中孵育的细胞进行。

12.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中采用不表达连接蛋白半通道的亲本细胞作为阴性对照。

13.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中采用被panexine 1转染的细胞作对照。

14.根据权利要求13所述的方法，其中在步骤(d)中，机械性刺激细胞以便诱导由panexine 1形成的半通道的开启。

15.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(d)中将细胞与至少一种化合物接触，所述化合物筛选于受残基限制的结合位点，所述残基对应于连接蛋白26中原体的残基3-10(NTH)、29-40(TM1)、74-93(TM2)片段和邻近原体的残基29-40(TM1)或者其它连接蛋白中的等同残基，且其中检测到Cx26或Cx43的半通道对示踪物的渗透能力中的改变，其中所述示踪物的渗透能力的改变指示化合物对半通道的调节。

16.权利要求1所述的方法获得的连接蛋白半通道的特异性抑制化合物的应用，其中所述化合物用于治疗和/或预防与连接蛋白26或43的过度激活相关的疾病的药物制备。

17.权利要求1的所述方法获得的连接蛋白半通道的特异性抑制化合物的应用，其中所述化合物用于治疗和/或预防炎性疾病、血管紊乱、心律失常、慢性损伤、视网膜神经保护、纤维症、疼痛治疗的药物制备。

18.根据权利要求16或17所述的应用，其中所述药物包括一种或多种连接蛋白的半通道的特异性抑制剂，选自喹啉衍生物或环戊烯醇或它们的结合。

19.根据权利要求18所述的应用，其中所述喹啉衍生物为(R)-2-(4-氯苯基(chlorofenil))-2-氧代-1-糠基乙基喹啉-2-羧酸乙酯。

20.根据权利要求18所述的应用，其中所述环戊二烯(cyclopentafenantren)衍生物为(2R，5S，8R，9S，10S，13S，14S，17S)-2-氟-10,13-二甲基-3-氧代十六氢-1H-环戊二烯(ciclopenta)并[a]芴(fenantren)-17-苯甲酸乙酯。