[发明专利]在环境温度下稳定血液样品中的非变性多肽、核酸和外来体

说明书

交叉引用

本申请要求提交于2014年6月10日的第62/010,164号美国临时申请的权益，该申请通过引用而全文并入于此。

发明背景

1.技术领域

本发明总体上涉及在环境温度下稳定血液样品中的一种或多种非变性核酸分子和/或多肽或外来体。具体而言，本发明涉及用于使血液样品中的一种或多种非变性核酸分子和/或多肽或外来体在环境温度下基本稳定储存的制剂、组合物、制品、试剂盒及方法。

2.背景技术

全血是细胞、核酸、蛋白质和多种其它分析物的复杂混合物。具体来说，血液成分包括但不限于：细胞，诸如白细胞(单核细胞、淋巴细胞及粒细胞)、红细胞、凝血细胞及循环肿瘤细胞；核酸分子，诸如循环游离DNA(cfDNA)；多肽，诸如脂蛋白、白蛋白及血清蛋白，以及其它多种分析物。

在某种程度上由于对于全血的相对较短半衰期及储存要求，一直存在对于献血者的全血的需求。例如，为了输血而采集的全血必须在冰中运输并储存在持续摇动的冷藏条件下，以保持完整的活细胞并且保护细胞和非细胞多肽、核酸分子及其它分析物免于化学及酶促降解。这种对冷藏条件的要求可限制全血供应在缺乏所需冷藏设施的地区的可用性，例如由于缺乏足以维持充分的冷藏温度的设备或必需的持续电力所导致的。

已经研究了用于在环境温度下稳定、运输及储存全血和血液成分的组合物和方法。虽然目前采用的组合物能够防止多肽及核酸分子的降解，但由于储存制剂和组合物中所采用的反应性组分，主要的局限性在于这些已稳定的多肽和核酸分子保持在变性的构象下，例如缺乏合适的二级和/或三级结构的单链DNA和解折叠的蛋白质。另外的局限性在于这些制剂可导致血细胞的裂解从而将细胞内容物释放到全血样品中，从而使得自由循环的多肽及核酸分子的后续定量和诊断分析由于污染了基因组DNA和细胞内蛋白质而变得复杂。

近来已开发出非侵入式诊断测试以利用母血中的循环无细胞DNA测定胎儿异常(例如，PLUS非侵入式胎儿异常测试，Sequenom,Inc)。这种手段的影响已促进了利用无细胞DNA和无细胞氨基酸分布来预测某些疾病的疾病状态和相对进展的进一步研究。由于在环境温度下该分布在相对较短的时间内发生变化，且暴露于4℃下可导致细胞表面上诊断标志物的虚假变化并增加释放到血浆或血清部分中的量，因此在较短的预定时间内使用采集的血液标本至关重要。虽然存在用于在室温下稳定无细胞核酸长达7天的采集管(Streck Labs)，但该管中提供的制剂的主要组分为能发生反应从而固定细胞并使其对于进入或离开细胞的试剂而言变得通透性较低的甲醛释放剂(诸如咪唑啉基脲或双咪唑烷基脲)。

因此，需要开发用于使核酸分子和多肽单独或共同地稳定的新制剂、组合物及方法，其中基本稳定的核酸分子和多肽在血液样品中于环境温度下保持其天然、非变性的构象。通过保持血细胞的完整性以防止所裂解的细胞成分污染循环核酸分子和多肽，同时还通过在环境温度下保存呈天然构象的功能活性多肽和核酸分子，本发明的制剂、组合物和方法有利地克服了前述局限性。这些已稳定的核酸分子和多肽可以在不需要冷藏或冷冻的情况下运输及储存，并且在环境温度下稳定延长的时间段，例如数天、数周、数月或甚至数年，从而有利于多种核酸分子和多肽的定量、分析和/或用于诊断和潜在治疗应用的用途。

发明内容