[发明专利]抗丙型肝炎抗体及其抗原结合片段

说明书

发明领域

本发明涉及能够产生针对丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白的免疫应答的抗体或其片段。

发明背景

迫切需要一种将保护免受丙型肝炎病毒(HCV)感染的疫苗，丙型肝炎病毒是肝硬化和肝癌的主要原因。目前不存在此类疫苗，并且HCV感染是主要的全球公共卫生问题。疫苗开发的障碍之一是病毒包膜糖蛋白的高遗传多样性。

HCV疫苗的发展受到包膜糖蛋白的高遗传多样性和其中存在的免疫显性高变区的阻碍。为了引发保护性抗体，免疫应答需要集中在保守的在功能上重要的区域。因此，广泛中和抗体(bnAb)的表位是疫苗设计的有吸引力的引导物。

一种这样的bnAb是已知抗体AP33，其结合HCV E2包膜糖蛋白上的保守线性表位(残基412-423)并且有效中和HCV的所有基因型。

跨HCV E2的残基412至423的AP33表位是线性的并且是高度保守的，并且包括在CD81识别中起关键作用的色氨酸残基。已经显示该抗体能够在所有主要基因型中中和HCV。可能模拟此类表位并引发AP33样抗体的免疫原的合理开发已被本领域中的一系列因素阻碍，包括缺少可用于病毒糖蛋白的详细结构信息。此外，用代表所述表位的肽接种不引发识别E2的抗体。

引发识别E2的抗体是本领域的一个问题。

本发明试图克服与现有技术相关的问题。

发明概述

丙型肝炎病毒(HCV)的广泛中和抗体的产生在本领域中是一个问题。常规方法，例如用代表HCV E2的关键表位(E2的残基412至423)的肽免疫接种，未能引发识别E2的抗体。

本发明人拒绝了基于E2肽免疫接种的常规方法。相反地，发明人寻求抗独特型方法。更具体地，本发明人已经产生针对已建立的AP33广泛中和抗体的抗独特型抗体。即便这种方法最初失败，直到本发明人应用来自AP33抗体的表位结合袋的结构分析的见解，以设计允许它们获得具有显著性质的B2.1A抗独特型抗体的基本选择技术。

本发明基于B2.1A抗体及其独特的特征。

因此，在一方面，本发明提供能够结合AP33抗体的抗原结合袋的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含分别由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成的VL CDR1(L1)、VL CDR2(L2)和VL CDR3(L3)，并且包含分别由SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26的氨基酸序列组成的VH CDR1(H1)、VH CDR2(H2)和VH CDR(H3)。

适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID NO：20的氨基酸序列组成的VL氨基酸序列。

适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID NO：22的氨基酸序列组成的VH氨基酸序列。

适当地，所述抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID NO：20的氨基酸序列组成的VL氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段包含由SEQ ID NO：22的氨基酸序列组成的VH氨基酸序列。

在另一方面，本发明涉及如上所述的抗体或其抗原结合片段，其中其抗原结合片段选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、scFv、Fv、rIgG和双抗体。

适当地，所述抗原结合片段是scFv，并且其中所述scFv包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：13的氨基酸序列。

在另一方面，本发明涉及核酸，其包含编码上述抗体或抗原结合片段的可变重链结构域和/或可变轻链结构域的核苷酸序列。

适当地，所述核酸包含选自SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：21的一个或多个核苷酸序列。

在另一方面，本发明涉及核酸，其包含与上述核苷酸序列互补的核苷酸序列。

在另一方面，本发明涉及包含上述核酸的载体。

适当地，所述载体还包含与编码可变重链结构域和/或可变轻链结构域的核酸可操作地连接的表达控制序列。

在另一方面，本发明涉及含有上述载体的宿主细胞。

适当地，细胞是真核细胞。

适当地，真核细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或人胚胎肾(HEK)细胞。

另一方面，本发明涉及产生抗体或其抗原结合片段的方法，包括培养如上所述的宿主细胞，使得所编码的可变重链结构域和/或可变轻链结构域由该细胞表达；并回收所表达的抗体或其抗原结合片段。