[发明专利]基于RGMa片段的诊断测定

权利要求书

1.检测和定量样品中的至少一种RGMa片段的方法，所述方法包括：

(a)从主体获得包含至少一种RGMa片段的样品；

(b)将所述样品与捕获结合蛋白接触，其中所述捕获结合蛋白结合所述至少一种RGMa片段以形成捕获结合蛋白-RGMa片段复合物；

(c)将所述样品与检测结合蛋白接触，其中所述检测结合蛋白与捕获结合蛋白相互作用以形成检测结合蛋白-捕获结合蛋白RGMa片段复合物，以及

(d)检测和定量样品中至少一种RGMa片段。

2.权利要求1的方法，其中所述至少一种RGMa片段为具有约1kDa至约65kDa的大小的RGMa片段。

3.权利要求1或2的方法，其中所述RGMa片段具有10kDa、18kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa或65kDa的大小。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述RGMa片段选自18kDa RGMa片段、30kDa RGMa片段和40kDa RGMa片段。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中至少一种RGMa片段在步骤(b)前使用凝胶电泳分离。

6.权利要求5的方法，其进一步包括在步骤(b)前将所述至少一种RGMa片段固定于膜上以产生Western印迹膜；在步骤(b)中，将所述Western印迹膜与所述捕获结合蛋白接触，其中所述捕获结合蛋白与固定于所述Western印迹膜上的至少一种RGMa片段结合，以形成捕获结合蛋白-RGMa片段复合物；以及在步骤(c)中，将所述Western印迹膜与检测结合蛋白接触，其中所述检测结合蛋白与所述捕获结合蛋白相互作用以形成检测结合蛋白-捕获结合蛋白RGMa片段复合物。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中检测至少两种RGMa片段。

8.权利要求7的方法，其中所述至少两种RGMa片段的大小为30kDa和40kDa。

9.权利要求1至6中任一项的方法，其中检测至少三种RGMa片段。

10.权利要求9的方法，其中所述至少三种RGMa片段的大小为18kDa、30kDa和40kDa。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述至少一种RGMa片段为可溶性RGMa片段。

12.权利要求5至11中任一项的方法，其进一步包括在步骤(b)中，在凝胶上同时分离RGMa蛋白标准物与样品中的蛋白；以及(g)将至少一种RGMa片段与分离的RGMa蛋白标准物比较以定量所述片段。

13.权利要求12的方法，其中所述RGMa蛋白标准物为重组RGMa片段梯度。

14.权利要求13的方法，其中所述梯度包含RGMa蛋白标准物10、25、50、100和200pg/mL。

15.权利要求1至14中任一项的方法，其中所述RGMa片段的大小由SDS-PAGE测定。

16.权利要求15的方法，其中所述SDS-PAGE为4-15%。

17.权利要求6至16中任一项的方法，其中所述膜为硝酸纤维素膜。

18.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述捕获结合蛋白为RGMa-选择性抗体。

19.权利要求18的方法，其中所述抗体为生物素化RGMa-选择性抗体。

20.权利要求19的方法，其中所述检测结合蛋白为四价抗生物素蛋白且所述可检测标记为生物素化辣根过氧化物酶。

21.权利要求20的方法，其中至少一种RGMa片段使用过氧化物酶染色试剂盒检测。