[发明专利]基于RGMa片段的诊断测定

说明书

发明领域

本发明涉及用于检测和测定样品中RGMa片段的测定法，以及该测定法用于确定、优化、预测和监测患有神经变性疾病的主体中的治疗的用途。

背景

多发性硬化(MS)是一种中枢神经系统的慢性炎性疾病。当前可用的伴有钆应用的MRI技术显现在疾病过程期间发生的多种病变并用作生物标志物。然而，脑脊液(CSF)和蛋白的研究可进一步理解疾病进展、慢性炎症和对治疗(诸如鞘内延迟释放类固醇应用)的反应之间的相互作用。

轴突再生的过程改善多发性硬化的临床结果。已知在髓磷脂和神经胶质结构中存在几种再生抑制剂，即髓磷脂相关糖蛋白；NogoA、OMgp(少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白)。另一种抑制剂为排斥导向分子A(RGMa)，其还阻碍神经元再生和功能恢复。RGMa是一种糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定糖蛋白，其为神经突生长的有效抑制剂且作为在CNS创伤或炎症后抑制神经元再生和功能恢复的重要因子出现。RGMa以膜结合和可溶形式存在，其对于神经突生长均为抑制性的。RGMa已定位于患有创伤性脑损伤或缺血性中风的人中的CNS髓磷脂、新鲜病变以及成熟疤痕组织中。

存在于脑和脊髓中的RGMa和其片段可促进神经变性且抑制神经再生。RGMa影响神经纤维的再生以及神经元的变性。使用基于ELISA的测定法检测RGMa种类，以鉴定再生活性的抑制。然而，这些测定法缺乏区分具有不同大小的RGMa片段的能力且通常不显示检测不同RGMa片段所需的高灵敏度水平。此外，基于ELISA的测定法因为体液中的蛋白量低而不能检测到RGMa。需要一种具有较高灵敏度且可检测和区分RGMa片段以及将RGMa片段与患有MS或任何其他神经变性疾病的患者中的增强的功能恢复和再生相关联的诊断测定法。

发明概述

本发明涉及检测和定量样品中至少一种RGMa片段的方法。该方法包括(a)从主体获得包含至少一种RGMa片段的样品；(b)将该样品与捕获结合蛋白接触，其中该捕获结合蛋白结合至少一种RGMa片段以形成捕获结合蛋白-RGMa片段复合物；(c)将该样品与检测结合蛋白接触，其中该检测结合蛋白与捕获结合蛋白相互作用以形成检测结合蛋白-捕获结合蛋白RGMa片段复合物，以及(d)检测和定量样品中至少一种RGMa片段。至少一种RGMa片段可以是具有约1kDa至约65kDa的大小的RGMa片段。该RGMa片段可具有10kDa、18kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa或65kDa的大小。RGMa片段可选自18kDa RGMa片段、30kDa RGMa片段和40kDa RGMa片段。在步骤(b)前，可利用凝胶电泳分离至少一种RGMa片段。可检测至少两种RGMa片段。至少两种RGMa片段的大小可以是30kDa和40kDa。可检测至少三种RGMa片段。该至少三种RGMa片段的大小可以是18kDa、30kDa和40kDa。至少一种RGMa片段可以是可溶性RGMa片段。该RGMa片段的大小可通过SDS-PAGE测定。SDS PAGE可以是4-15%。捕获结合蛋白可以是RGMa-选择性抗体。该抗体可以是生物素化RGMa-选择性抗体。检测结合蛋白可以是四价抗生物素蛋白且可检测标记可以是生物素化辣根过氧化物酶。可使用过氧化物酶染色试剂盒检测至少一种RGMa片段。该RGMa片段可以是人RGMa片段。方法样品可包含脑脊液、血液、血清或血浆。