[发明专利]制备腺垂体或其前体组织的方法

权利要求书

1.用于制备包含腺垂体或其前体组织的人细胞聚集体的方法，所述方法包括：

(a)在含有骨形态发生蛋白信号转导途径激活物质和作用于Shh信号途径的物质的培养基中悬浮培养人多能干细胞的聚集体，从而获得包含(i)在所述细胞聚集体内部的下丘脑神经上皮组织和(ii)在所述细胞聚集体表面的表面外胚层的人细胞聚集体；

(b)将所获得的包含下丘脑神经上皮组织和表面外胚层的人细胞聚集体在含有骨形态发生蛋白信号转导途径激活物质和作用于Shh信号途径的物质的培养基中进一步悬浮培养，从而诱导在所述表面外胚层中形成垂体基板和/或拉特克囊，由此获得包含(i)在所述细胞聚集体内部的下丘脑神经上皮组织和(ii)在所述细胞聚集体表面的垂体基板和/或拉特克囊的人细胞聚集体；和

(c)将所述包含(i)下丘脑神经上皮组织和(ii)垂体基板和/或拉特克囊的人细胞聚集体在包含作用于Shh信号途径的物质的培养基中悬浮培养37至70天，从而诱导垂体基板和/或拉特克囊向垂体激素生产细胞分化，由此获得包含(i)在所述细胞聚集体内部的下丘脑神经上皮组织和(ii)在所述细胞聚集体表面的腺垂体的人细胞聚集体，

其中骨形态发生蛋白信号转导途径激活物质选自由BMP2、BMP4、BMP7和GDF5组成的组，并且其中作用于Shh信号途径的物质选自由Shh、SAG和Purmorphamine组成的组。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中用于步骤(b)中的培养基还包含FGF2。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中用于步骤(c)中的培养基还包含FGF2。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中用于步骤(c)中的培养基还包含Notch信号抑制剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中所述Notch信号抑制剂是DAPT。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述垂体激素生产细胞是选自由下述组成的组的至少一种：生长激素(GH)生产细胞，促乳素(PRL)生产细胞和促肾上腺皮质素(ACTH)生产细胞。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述骨形态发生蛋白信号转导途径激活物质是BMP4。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述作用于Shh信号途径的物质是SAG。

9.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述下丘脑神经上皮组织是腹侧下丘脑神经上皮组织。

10.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述多能干细胞是胚胎干细胞或诱导的多能干细胞。

11.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中所述悬浮培养在不存在饲养细胞的条件下进行。

12.通过根据权利要求1-11中任一项所述的制备方法可获得的细胞聚集体，所述腺垂体含有生长激素(GH)生产细胞，促乳素(PRL)生产细胞和促肾上腺皮质素(ACTH)生产细胞。

13.根据权利要求12所述的人细胞聚集体，其中所述腺垂体还含有促甲状腺激素(TSH)生产细胞，促卵泡激素(FSH)生产细胞，促黄体激素(LH)生产细胞或促黑激素(MSH)生产细胞。