[发明专利]从多能性干细胞诱导细胞免疫治疗用T细胞的方法

权利要求书

1.一种制备T细胞的方法，包括以下步骤：

（1）提供具有编码期望抗原特异性T细胞受体的基因并且敲除了Rag1和/或Rag2基因的人类多能性干细胞，

（2）从步骤（1）的所述多能性干细胞诱导T 细胞，

（3）用流式细胞术从步骤（2）得到的T细胞的群体中分离CD4CD8双阳性T细胞，以及

（4）从步骤（3）得到的CD4CD8双阳性T细胞诱导CD8单阳性T细胞；

其中，步骤（1）的所述多能性干细胞是通过包含以下步骤的方法制备的：

（a）通过向所述多能性干细胞中导入编码所述抗原特异性T细胞受体的基因，诱导具有编码所述抗原特异性T细胞受体的基因的多能性干细胞，以及

（b）通过基因组编辑敲除步骤（a）中得到的所述多能性干细胞中的所述Rag1和/或Rag2基因。

2.一种制备T细胞的方法，包括以下步骤：

（1）提供具有编码期望抗原特异性T细胞受体的基因并且敲除了Rag1和/或Rag2基因的人类多能性干细胞，

（2）从步骤（1）的所述多能性干细胞诱导T细胞，

（3）用流式细胞术从步骤（2）得到的T细胞的群体中分离CD4CD8双阳性T细胞，以及

（4）从步骤（3）得到的CD4CD8双阳性T细胞诱导CD8单阳性T细胞；

其中，步骤（1）的所述多能性干细胞是通过包括以下步骤的方法获得的：

（a）通过基因组编辑敲除人类多能性干细胞中的Rag1和/或Rag2基因，以及

（b）向步骤（a）中得到的所述敲除了Rag1和/或Rag2的多能性干细胞中导入编码所述抗原特异性T细胞受体的基因。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述人类多能性干细胞为人类iPS细胞。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，通过CRISPER-Cas9敲除所述Rag1和/或Rag2基因。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述人类多能性干细胞被敲除的基因是Rag2基因。

6.一种制备T细胞的方法，包括以下步骤：

（1）从iPS细胞银行中选择从具有纯合的HLA单倍型的供体建立的iPS细胞，所述纯合的HLA单倍型与待治疗的患者的HLA单倍型中的至少一个相匹配，其中，

所述iPS细胞银行中，与每个供体的HLA信息相关联地存储有从具有纯合的HLA单倍型的供体建立并且敲除了Rag1和/或Rag2基因的iPS细胞，

（2）向所选的敲除了Rag1和/或Rag2基因的iPS细胞中导入用于所述治疗的编码抗原特异性T细胞受体的基因，

（3）将所述导入有所述编码抗原特异性T细胞受体的基因并且敲除了Rag1和/或Rag2基因的iPS细胞分化为T细胞；

（4）用流式细胞术从步骤（3）得到的T细胞的群体中分离CD4CD8双阳性T细胞，以及

（5）从步骤（4）得到的CD4CD8双阳性T细胞诱导CD8单阳性T细胞。

7.一种制备T细胞的方法，包括以下步骤：

（1）从iPS细胞银行中选择从具有纯合的HLA单倍型的供体建立的iPS细胞，所述纯合的HLA单倍型与待治疗的患者的HLA单倍型中的至少一个相匹配，其中，

所述iPS细胞银行中，与每个供体的HLA信息相关联地存储有从具有纯合的HLA单倍型的供体建立的iPS细胞，

（2）通过基因组编辑敲除所选的iPS细胞中的Rag1和/或Rag2基因，

（3）向步骤（2）中得到的所述敲除了Rag1和/或Rag2基因的iPS细胞中导入用于所述治疗的编码抗原特异性T细胞受体的基因，以及

（4）将所述导入有所述编码抗原特异性T细胞受体的基因并且敲除了Rag1和/或Rag2基因的iPS细胞分化为T细胞；

（5）用流式细胞术从步骤（4）得到的T细胞的群体中分离CD4CD8双阳性T细胞，以及

（6）从步骤（5）得到的CD4CD8双阳性T细胞诱导CD8单阳性T细胞。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中，所述iPS细胞被敲除的基因是Rag2基因。