[发明专利]用于监测组织蛋白酶S抑制的方法

说明书

本发明提供抗li p10肽的抗体及其在用于监测组织蛋白酶S抑制的方法中的用途。

组织蛋白酶S因其在蛋白水解消化不变链蛋白伴侣分子，从而控制抗原通过主要组织相容性复合体(MHC)II类分子呈递给CD4⁺ T细胞或通过CD1分子呈递给NK1.1+ T细胞中的重要功能而闻名。组织蛋白酶S似乎还参与通过MHC II类呈递给CD4⁺ T细胞的外源抗原的直接加工，或参与通过MHC I类分子交叉呈递给CD8⁺ T细胞。此外，组织蛋白酶S以其分泌形式涉及胞外基质降解，这可促成许多疾病的病理，包括关节炎、动脉粥样硬化和慢性阻塞性肺疾病。因此，对于开发用于多种适应症的新治疗剂，组织蛋白酶S的抑制是有前景的靶标。

MHC II类分子结合并展示抗原肽，作为抗原呈递细胞(APC)的细胞表面上的由CD4⁺辅助细胞识别的II类-肽复合体。导致形成II类-肽复合体并在细胞表面呈递抗原的分子机制始于内质网中的II类αβ异二聚体合成。在生物合成期间，这些αβ异二聚体与II型膜蛋白(不变链li的同种型)结合，形成αβli的九聚复合体。αβli复合体穿过高尔基体，递送至胞内区室。在这些酸性区室中，li被降解，并最终从αβli复合体释放，允许II类分子结合抗原肽。li的蛋白水解加工产生更短的片段。在APC中，半胱氨酸蛋白酶组织蛋白酶S在加工li中发挥关键作用。组织蛋白酶S降解来自II类-li复合体的的不变链li，产生II类-CLIP。因此，组织蛋白酶S的抑制导致CLIP肽减少，前体片段(即不变链li降解肽p10(li p10))累积。

EP 1 315 966公开了用于监测体内施用组织蛋白酶S抑制剂的作用的方法。该方法包括从用组织蛋白酶S抑制剂处理的个体的血样纯化白细胞，制备所纯化的白细胞的全细胞裂解物，并针对不变链li的li p10片段的存在分析全细胞裂解物。此方法需要约10-30ml血样，且耗费劳力(分离白细胞和制备全细胞裂解物)。li p10的检测通过ELISA或Western印迹进行。

本发明的目的是提供监测组织蛋白酶S抑制的测定，该测定克服现有技术方法的至少一些缺点。

在第一目的中，本发明提供用于监测动物组织样品中的组织蛋白酶S抑制剂活性的方法，其包括：

a)提供已对其施用组织蛋白酶S抑制剂的动物的组织样品，或提供在体外与组织蛋白酶S抑制剂接触过的动物组织样品，其中组织样品包含白细胞；

b)通过流式细胞术测量步骤a)的组织样品的白细胞中的li p10肽水平；和

c)使白细胞中的li p10肽水平与组织蛋白酶S抑制剂剂量关联，其中组织蛋白酶S抑制剂导致白细胞中li p10肽水平提高。

在第二目的中，本发明提供用于鉴定组织蛋白酶S抑制剂的方法，其包括：

a)用测试化合物处理非人动物；

b)提供步骤a)的动物的包含白细胞的组织样品；

c)测量步骤b)的组织样品的白细胞中的li p10肽水平；

其中与未经处理的动物的组织样品中的白细胞中li p10肽的水平相比，步骤a)的样品中的白细胞中li p10肽水平的提高指示组织蛋白酶S抑制剂。

在本发明方法的优选实施方案中，该组织样品是血液。

在本发明方法的另一优选实施方案中，该白细胞是抗原呈递细胞(APC)，优选地，该APC选自B细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞，更优选选自B细胞和单核细胞。

本文所用的术语抗原呈递细胞(APC)指将抗原肽作为(MHC)II类-抗原肽复合体展示在其表面的细胞。APC包括树突细胞、单核细胞、巨噬细胞和B细胞。

在第三目的中，本发明提供抗li p10抗体，其包含：

包含含有氨基酸序列Seq.Id.No.4的CDR1、含有氨基酸序列Seq.Id.No.5的CDR2、含有氨基酸序列Seq.Id.No.6的CDR3的VH结构域，及包含含有氨基酸序列Seq.Id.No.7的CDR1、含有氨基酸序列Seq.Id.No.8的CDR2、含有氨基酸序列Seq.Id.No.9的CDR3的VL结构域。

在本发明的具体实施方案中，抗li p10抗体的VH结构域包含氨基酸序列Seq.Id.No.10，抗li p10抗体的VL结构域包含氨基酸序列Seq.Id.No.11.