[发明专利]从ΔG的浓度依赖性来测定蛋白质聚集

权利要求书

1.一种基于所述溶液的蛋白质浓度的溶液中用于蛋白质聚集的量或分数的方法，包括：

提供包含增加浓度的蛋白质的若干第一溶液；

测量所述若干第一溶液中每个溶液的可观察的特征；

基于所述可观察的特征，确定所述若干第一溶液中每种浓度下蛋白质的构象稳定性的ΔG；创建ΔG与每种浓度的所述蛋白质之间的相关性；和

使用所述相关性来确定被聚集的所述蛋白质的量和/或分数。

2.根据权利要求1所述的方法，所述若干溶液中的每种溶液无条件不同或不超过三种条件不同，所述条件选自由缓冲液组成、缓冲液强度、pH、离子强度、赋形剂组成、赋形剂浓度、化学变性剂组成和化学变性剂浓度构成的组。

3.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：

提供包括增加浓度的所述蛋白质的若干至少第二溶液；

测量所述若干至少第二溶液中的每种溶液的可观察的特征；

基于所述可观察的特征，确定所述若干至少第二溶液中每种浓度的蛋白质的构象稳定性的ΔG；

创建所述若干至少第二溶液的ΔG与所述蛋白质的每种浓度之间的相关性；和

使用所述相关性来确定所述若干至少第二溶液中聚集的蛋白质的量或分数；

所述若干至少第二溶液与所述若干第一溶液的区别在于一个或多个条件，所述条件选自由缓冲液组成、缓冲液强度、pH、离子强度、赋形剂组成、赋形剂浓度、化学变性剂组成和化学变性剂浓度构成的组。

4.根据权利要求3所述的方法，所述若干至少第二溶液中的每种溶液无条件不同或不超过三种条件不同，所述条件选自由缓冲液组成、缓冲液强度、pH、离子强度、赋形剂组成、赋形剂浓度、化学变性剂组成和化学变性剂浓度构成的组。

5.根据权利要求3所述的方法，所述若干至少第二溶液包含与所述若干第一溶液相同浓度的所述蛋白质的溶液。

6.根据权利要求3所述的方法，对于若干第一溶液的每个溶液和若干至少第二溶液的每个溶液，进一步包括创建ΔG与条件之间的相关性，所述条件选自由缓冲液组成、缓冲液强度、pH、离子强度、赋形剂组成、赋形剂浓度、化学变性剂组成和化学变性剂浓度构成的组。

7.根据权利要求3所述的方法，进一步包括创建聚集的所述蛋白质的量或分数与条件之间的相关性，所述条件选自由缓冲液组成、缓冲液强度、pH、离子强度、赋形剂组成、赋形剂浓度、化学变性剂组成和化学变性剂浓度构成的组。

8.根据权利要求3所述的方法，进一步包括比较所述若干第一溶液中聚集的蛋白质的量或分数与所述若干至少第二溶液中聚集的蛋白质的量或分数。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法能够检测或确定1ng/ml或更少的变性的蛋白质或1ng/ml或更少的聚集的蛋白质。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述聚集的蛋白质的量或分数在24小时内测定。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述若干第一溶液中的每个溶液包含0.1μg/ml至0.2μg/ml的所述蛋白质。

12.根据权利要求3所述的方法，其中，所述若干至少第二溶液中的每个溶液包含0.1μg/ml至0.2μg/ml的所述蛋白质。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述可观察的特征是荧光性。

14.根据权利要求3所述的方法，其中，所述若干至少第二溶液与所述若干第一溶液的区别至少在于化学变性剂浓度。

15.根据权利要求1所述的方法，进一步包括鉴定使ΔG最大化并使ΔG的蛋白质浓度依赖性最小化的蛋白质浓度的步骤。

16.根据权利要求1所述的方法，进一步包括使用所述相关性来确定在所述若干第一溶液中所述变性的蛋白质的量或分数和聚集的所述变性的蛋白质的分数的步骤。

17.根据权利要求16所述的方法，进一步包括确定所述若干至少第二溶液中变性的所述蛋白质的量或分数和聚集的所述变性的蛋白质的分数的步骤；和

比较所述若干第一溶液中聚集的所述蛋白质的量或分数或变性的所述蛋白质的量或分数与所述若干至少第二溶液中聚集的所述蛋白质的量或分数或变性的所述蛋白质的量或分数的步骤。