[发明专利]基于Gβγ互作蛋白监测G蛋白激活的生物传感器有效
| 申请号： | 201580055471.5 | 申请日： | 2015-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN107074926B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 米歇尔·鲍维尔;克里斯蒂安·勒古;米雷列·霍格;维多利亚·卢卡舍娃 | 申请（专利权）人： | 蒙特利尔大学 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K19/00;C12N15/12;C12N15/62;G01N33/53 |
| 代理公司： | 北京银龙知识产权代理有限公司 11243 | 代理人： | 钟海胜;宋琴芝 |
| 地址： | 加拿大*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 蛋白 监测 激活 生物 传感器 | ||
1.一种用于在真核细胞中检测G蛋白活性的生物传感器系统，所述生物传感器系统包括：
(i)第一生物传感器，其包括：
第一组件，其包括融合于生物发光共振能量转移(BRET)供体或BRET受体的氨基端的天然GRK2蛋白或GRK3蛋白，所述天然GRK2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述天然GRK3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；
第二组件，其包括Gβ蛋白和Gγ5蛋白，其中所述Gγ5蛋白融合于BRET供体或BRET受体的羧基端；和
第三组件，其包括G蛋白偶联受体(GPCR)；
(ii)第二生物传感器，其包括：
(i)中定义的第一组件、第二组件和第三组件；和
包括重组Gα蛋白的第四组件；
其中，如果所述天然GRK2或GRK3蛋白融合于所述BRET供体，则所述Gγ5蛋白融合于所述BRET受体；或如果所述天然GRK2或GRK3蛋白融合于所述BRET受体，则所述Gγ5蛋白融合于所述BRET供体。
2.权利要求1所述的生物传感器系统，其中，所述天然GRK2或GRK3蛋白融合于所述BRET受体，并且所述Gγ5蛋白融合于所述BRET供体。
3.权利要求1或2所述的生物传感器系统，其中，所述BRET供体是生物发光蛋白。
4.权利要求3所述的生物传感器系统，其中，所述生物发光蛋白是荧光素酶。
5.权利要求4所述的生物传感器系统，其中，所述荧光素酶是海肾荧光素酶。
6.权利要求1或2所述的生物传感器系统，其中，所述BRET受体是荧光蛋白。
7.权利要求6所述的生物传感器系统，其中，所述荧光蛋白是绿色荧光蛋白。
8.权利要求1或2所述的生物传感器系统，其中，所述第一组件进一步包括融合于所述天然GRK2或GRK3，或所述BRET供体或BRET受体的质膜靶向部分。
9.权利要求8所述的生物传感器系统，其中，所述质膜靶向部分融合于所述BRET供体或BRET受体的C端。
10.权利要求8所述的生物传感器系统，其中，所述质膜靶向部分包括异戊二烯化基序。
11.权利要求10所述的生物传感器系统，其中，所述异戊二烯化基序是人KRAS剪接变体b的异戊二烯化基序。
12.权利要求11所述的生物传感器系统，其中，所述质膜靶向部分包括氨基酸序列KKKKKKSKTKCVIM(SEQ ID NO:37)。
13.权利要求8所述的生物传感器系统，进一步包括所述BRET供体或BRET受体与所述质膜靶向部分之间的柔性接头。
14.权利要求13所述的生物传感器系统，其中，所述柔性接头具有50至500个氨基酸的长度。
15.权利要求14所述的生物传感器系统，其中，所述柔性接头具有200个氨基酸的长度。
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