[发明专利]具有锁核酸的序列转换和信号扩增DNA以及使用其的检测方法有效
| 申请号： | 201580056020.3 | 申请日： | 2015-10-13 |
| 公开（公告）号： | CN107075585B | 公开（公告）日： | 2021-07-20 |
| 发明（设计）人： | 小宫健;小森诚;吉村徹 | 申请（专利权）人： | 雅培实验室;国立大学法人东京工业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/682;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京市中伦律师事务所 11410 | 代理人： | 石宝忠 |
| 地址： | 美国伊*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 具有 核酸 序列 转换 信号 扩增 dna 以及 使用 检测 方法 | ||
1.一种试剂在制备用于检测样品中靶核酸的组合物中的用途，所述试剂包含：
第一寡核苷酸，所述第一寡核苷酸在5'至3'方向上包含信号DNA产生序列、核酸内切酶识别位点和包含锁核酸且与所述靶核酸的3'端互补的序列；
第二寡核苷酸，所述第二寡核苷酸在5'至3'方向上包含与所述第一寡核苷酸的信号DNA产生序列同源的信号DNA产生序列、核酸内切酶识别位点和包含锁核酸且与所述第一寡核苷酸的信号DNA产生序列同源的序列；
聚合酶；和
用于切口反应的核酸内切酶；
其中所述锁核酸位于从所述第二寡核苷酸的3'端的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或其组合处。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述第二寡核苷酸包含2、3或4个锁核酸。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述锁核酸位于从所述第二寡核苷酸的3’端的位置3和6处。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述锁核酸位于发夹结构的茎中。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述茎包含2至10个碱基对。
6.根据权利要求1所述的用途，其中所述与所述靶核酸的3'端互补的序列还包含锁核酸。
7.根据权利要求1所述的用途，其中当将所述组合物用于检测所述靶核酸的方法中时，所述方法在基本恒定的温度下进行，并且其中所述基本恒定的温度在+/-5℃的范围内波动。
8.根据权利要求1所述的用途，其中当将所述组合物用于检测所述靶核酸的方法中时，所述方法在20℃至42℃的温度下进行。
9.根据权利要求1所述的用途，其中所述聚合酶具有链置换活性。
10.根据权利要求1所述的用途，其中所述聚合酶是3'至5'核酸外切酶缺乏的、5'至3'核酸外切酶缺乏的或者二者。
11.根据权利要求1所述的用途，其中所述聚合酶包含选自由如下组成的组中的DNA聚合酶：从大肠杆菌获得的DNA聚合酶I的Klenow片段、从嗜热脂肪芽孢杆菌获得的5'至3'核酸外切酶缺乏型Bst DNA聚合酶、和从热坚芽孢杆菌获得的5'至3'核酸外切酶缺乏型BcaDNA聚合酶。
12.根据权利要求1所述的用途，其中所述核酸内切酶是选自由Nb.BbvCI、Nt. AlwI、Nt.BbvCI和Nt.BsmAI所组成的组中的酶。
13.根据权利要求1所述的用途，其中所述靶核酸是微RNA。
14.根据权利要求1所述的用途，其中所述靶核酸来源于感染物。
15.一种用于检测样品中靶核酸的组合物，所述组合物包含：
第一寡核苷酸，所述第一寡核苷酸在5’至3’方向上包含信号DNA产生序列、核酸内切酶识别位点和包含锁核酸且与所述靶核酸的3’端互补的序列；
第二寡核苷酸，所述第二寡核苷酸在5’至3’方向上包含与所述第一寡核苷酸的信号DNA产生序列同源的信号DNA产生序列、核酸内切酶识别位点和包含锁核酸且与所述第一寡核苷酸的信号DNA产生序列同源的序列；
其中所述锁核酸位于从所述第二寡核苷酸的3’端的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或其组合处。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述锁核酸位于从所述第二寡核苷酸的3’端的位置3和6处。
17.根据权利要求15所述的组合物，其中所述锁核酸位于发夹结构的茎中。
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