[发明专利]肠道病毒灭活的改进的方法、佐剂吸附及其获得的剂量减少的疫苗组合物

权利要求书

1.一种制备包含肠道病毒颗粒的疫苗组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)制备含有所述肠道病毒颗粒的培养基；

b)从所述培养基纯化所述肠道病毒颗粒，所述培养基包含磷酸盐缓冲液；

c)在pH6.8-7.2，浓度30mM-60mM的TRIS缓冲液中收集所述肠道病毒颗粒，

d)通过添加含有甘氨酸的M-199培养基至终浓度为具有0.05％甘氨酸的1×M-199稳定所纯化的肠道病毒颗粒；

e)使用0.025％的福尔马林在37℃灭活所述肠道病毒颗粒5-13天；以及

f)将肠道病毒颗粒吸附在浓度为1.5mg/0.5mL剂-2.5mg/0.5mL剂之间的氢氧化铝佐剂上，其中在铝上的吸附百分率至少为95％，

其中所述肠道病毒颗粒是脊髓灰质炎病毒颗粒。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(c)中的缓冲液浓度为40mM。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在疫苗中的总铝含量为每0.5mL剂0.8mg Al³⁺，其特征在于对于1型为0.4mg Al³⁺，对于2型为0.2mg Al³⁺，对于3型为0.2mg Al³⁺。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述肠道病毒颗粒包含Sabin血清型1型、2型和3型的脊髓灰质炎病毒。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述肠道病毒颗粒包含Salk血清型1型IPV、2型IPV和/或3型IPV的脊髓灰质炎病毒。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述1型是Mahoney毒株，所述2型是MEF-1毒株，和/或所述3型是Saukett毒株。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述疫苗是剂量减少的灭活的脊髓灰质炎疫苗。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述剂量减少的灭活的脊髓灰质炎疫苗包含剂量为6-11D-抗原单位的3型灭活的脊髓灰质炎病毒，而不是标准剂量的32D-抗原单位的3型灭活的脊髓灰质炎病毒。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：

a)制备含有所述脊髓灰质炎病毒的培养基；

b)从所述培养基纯化所述脊髓灰质炎病毒；

c)在pH6.8-7.2，浓度40mM的TRIS缓冲液中收集所述肠道病毒颗粒，

d)通过加入含有甘氨酸的M-199培养基至终浓度为具有0.05％甘氨酸的1×M-199稳定所纯化的脊髓灰质炎病毒；

e)在浓度为30mM-60mM的TRIS缓冲液存在下使用0.025％的甲醛在37℃灭活所述脊髓灰质炎病毒5-13天，以防止或减少脊髓灰质炎病毒颗粒的聚集，从而与磷酸盐缓冲液相比，灭活后D-抗原损失减少8-10倍；以及

f)在氢氧化铝佐剂上吸附灭活的脊髓灰质炎病毒，其中在疫苗组合物中的总铝含量为0.8mg，并且对于1型脊髓灰质炎病毒、2型脊髓灰质炎病毒和3型脊髓灰质炎病毒，氢氧化铝上的吸附百分比是至少95％。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述疫苗组合物不包含2型脊髓灰质炎病毒。