[发明专利]肠道病毒灭活的改进的方法、佐剂吸附及其获得的剂量减少的疫苗组合物

说明书

本发明涉及在缓血酸胺缓冲液存在下用甲醛灭活肠道病毒的改进的方法，导致D‑抗原的最大回收。随后将所述sIPV吸附在氢氧化铝上提供剂量显著减少的sIPV组合物。

发明背景

通过使用基于减毒活的Sabin脊髓灰质炎毒株的口服的脊髓灰质炎疫苗[OPV]，大大减少了脊髓灰质炎病毒的流行。然而，OPV对于后根除时代具有局限性。因此，开发Sabin-IPV在WHO脊髓灰质炎根除战略中发挥重要的作用。使用减毒的Sabin代替野生型Salk脊髓灰质炎毒株将在疫苗生产过程中提供额外的安全性。此外，为了防止可传播的疫苗衍生的脊髓灰质炎病毒(cVDPVs)的出现，应在脊髓灰质炎根除后停止使用OPV，并用IPV取代。这些cVDPVs是可传播的，并且可以变成神经毒性的(类似于野生的脊髓灰质炎病毒)引起与疫苗相关的麻痹性脊髓灰质炎。这样的毒株潜在地可以在世界重新传播脊髓灰质炎病毒并使根除成果无效。

IPV通过肌内(IM)或深层皮下(SC)注射递送。IPV目前可以作为非佐剂化的独立配制物或以不同的组合使用，包括DT-IPV(具有白喉和破伤风类毒素)和六价DTPHepB-Hib-IPV疫苗(另外还有百日咳、乙型肝炎和流感嗜血杆菌b)。目前可接受的脊髓灰质炎疫苗的标准剂量含有的D抗原包括40单位的灭活脊髓灰质炎病毒1型(Mahoney)、8单位的灭活脊髓灰质炎病毒2型(MEF-1)和32单位的灭活脊髓灰质炎病毒3型(Saukett)(例如Infanrix-IPV^TM)。现有的独立IPV的制备不包含佐剂。

大多数专家认同全球范围内使用IPV是优选的，因为其被证明的保护性追踪记录和安全性。然而，当与OPV比较时，IPV的成本价格明显更高。这主要是因为下列需要：(i)每剂中更多的病毒；(ii)额外的下游处理(即浓缩、纯化和灭活)和相关的QC-检验(iii)抗原的损失或下游回收差以及iv)容量(containment)。到目前为止，中低收入国家财务上的挑战一直是IPV创新和实施主要的不利条件。sIPV的生产成本目前估计等于IPV的生产成本，这比OPV的生产成本高20倍。根除脊髓灰质炎病毒后，未来全球对于IPV的需求可能从目前的每年8000万剂水平增加到每年4.5亿剂。因此，可能需要“扩大”IPV供应的方法。

在常规疫苗供应不足以满足全球需要或生产常规疫苗的成本阻碍疫苗在发展中国家以其可承受的价格销售的情况下，需要剂量减少的有效疫苗制剂，其使用更低剂量的IPV抗原提供针对感染的保护。相比于现有的市场制剂，接受更低剂量的IPV可能更安全。因此，需要评估以更可承受的价格制备IPV的多种策略。

在大流行性流感疫苗的情况下，使用佐剂允许减少剂量，增加可用性并降低疫苗的成本。因此，据推测，sIPV的含佐剂疫苗制剂将降低成本并且还增加全球可用的sIPV剂的数量。

全球的不同研究小组一直在评估通过使用若干佐剂的疫苗(特别是流感疫苗)剂量减少(dose sparing)，使用的佐剂有铝、乳液、TLR激动剂(MPL、CpG、poly-IC、咪喹莫特)、dmLT、1,25-二羟维生素D3、CAF01、聚[二(羧基苯氧基)-磷腈](PCPP)和委内瑞拉马脑炎(VEE)复制子颗粒。大多数正在研究的佐剂类型遇到以下障碍：i)未知安全性或被监管机构分类为有毒性的ii)对施用途径有限制iii)缺乏制造重复性iv)佐剂的稳定性。

之前报道了乳液佐剂(MF-59、AS03、AF3)为流感和乙型肝炎疫苗提供很强的剂量减少作用(30倍)。这些佐剂通过在注射部位形成贮存库而发挥作用，使抗原物质分配释放并刺激产生抗体的浆细胞。然而，这些佐剂被认为对于广泛使用的人类预防性疫苗的使用来说毒性太大，并且通常保留用于那些对副作用具有更高的耐受性的严重和/或晚期的情况，例如癌症。

此外，铝盐被认为是安全的，已经用于包含sIPV的组合疫苗中，具有最低的发展障碍并且能便宜的生产。然而，铝的佐剂对于允许显著的剂量减少是未知的。