[发明专利]用于利用免疫荧光的酶免疫测定的组合物及其用途

说明书

本发明涉及利用免疫荧光的酶免疫测定的组合物。本发明的特征在于所述组合物包含(i)荧光生成酶促底物以及(ii)在荧光生成酶促底物(i)的水解之后形成荧光化合物的猝灭的荧光生成化合物。

本发明涉及用于利用免疫荧光的酶免疫测定的组合物，包含这样的组合物的用于免疫分析的试剂盒和自动化装置，还有通过利用免疫荧光的酶免疫测定体外检测和/或定量所关注的分析物的相关方法。

利用免疫测定的检测方法广泛用于诊断领域。这些方法使得可以检测测试样品中的分析物，特别是蛋白质(抗原/抗体)、肽和半抗原的形式，例如类固醇或维生素。免疫测定是本领域技术人员公知的方法，包括待检测的分析物与这种分析物的一种或多种结合配对物之间的免疫反应。

然后免疫测定的结果由实验室提供给医生，所述医生会解释它们以便例如诊断病理状况或不期望的微生物的存在，然后采取必要措施，例如向患者给予适当治疗或净化包含这些不期望的微生物的工业环境。因此对于这些测定，高度灵敏(在这个意义上，它们不给出假阴性)和高度特异性(在这个意义上，它们不给出假阳性)特别重要。

酶免疫测定或EIA是在可能包含所关注的分析物的样品分析领域中广泛使用的一种类型的免疫测定。这些测定与酶催化的反应相关，使用酶促底物。根据所选的酶促底物，可以有比色信号(ELISA技术，酶联免疫吸附测定)(Rassasie,M.J.,et al.,1992)、荧光信号(ELFA技术，酶联荧光测定)或化学发光信号(CLIA，化学发光免疫测定)(Stabler T.V.,et al.,1991)。

这些方法是基于使得可以在测试样品分析期间将发出的信号定量的测量。检测的信号量一般与待测量的分析物量成比例(例如夹心测定期间)或与待测量的分析物量成反比(例如竞争性测定)。

使得可以定量荧光信号并获得更灵敏的结果的“ELFA”技术使用将荧光生成酶促底物转化为荧光反应产物以及任选地转化为一种或多种其他反应产物的酶，根据本领域技术人员公知的一般方程(1)：

E+S→ES→E+S* (1)

其中“E”为酶，“S”为荧光生成酶促底物，“ES”对应于酶-底物复合物，并且“S*”对应于荧光生成酶促底物所致的荧光反应产物。

反应介质中包含的反应产物S*在通过特定波长的光激发时变成荧光。

实际上，应用荧光的原理，暴露于对应于第一波长的光源或通过对应于第一波长的光源激发的反应产物将转而发射第二波长的光线或荧光信号。第一激发波长一般在250-450nm的范围中变化。就其本身而言，第二发射波长位于300-600nm的发射范围中。

因此，荧光信号的检测(以相对荧光单位计)与源自反应介质的这些荧光信号的信号处理相组合(其本身源自待检测的样品且包含反应产物)使得可以确定例如样品内寻求的所关注的分析物的存在或浓度。

尽管如此，即使ELFA技术比ELISA比色测定更灵敏，本领域技术人员仍然寻求使得可以进一步改进信号检测的解决方案。这是因为荧光测量存在非特异性地减少或增加信号输出的问题。

因此，荧光的检测可以作为参数的函数变化，所述参数如pH、温度、离子浓度、干燥度、与测试样品或固体基质相关的干扰的存在。这些参数特别影响光散射和背景噪声，其影响测定的灵敏度，特别是使用荧光(“Selecting the Detection System–Colorimetric,Fluorescent,Luminescent Methods”(Gibbs et al.,Elisa Technical Bulletin–No.5,2001)。

鉴于上述情况，目前需要寻找新的方式或其他方式使得可以增加ELFA技术的特异性和灵敏度。

因此，本发明旨在解决的技术问题是使利用免疫荧光的酶免疫测定更有效和更快速，特别是增加灵敏度，即当验证了假设时，特别是当分析物少量存在于测试样品中时，增加给出阳性结果的能力。