[发明专利]修饰的κ轻链-结合多肽

说明书

一种包含消化链球菌(Peptostreptococcus)蛋白L的一个或多个结合结构域或基本由其组成的κ轻链‑结合多肽，每个所述结构域选自结构域2、结构域3和结构域4。

发明领域

本发明涉及亲和色谱领域，并且更特别地涉及包含蛋白L的κ轻链-结合结构域的多肽，其可用于许多类型的免疫球蛋白和免疫球蛋白片段的亲和色谱。本发明还涉及含有所述多肽的分离基质和使用这样的分离基质的分离方法。

发明背景

免疫球蛋白和免疫球蛋白片段代表全世界生产或开发的最普遍的生物制药产品。对于这种特定治疗市场的高商业需求，以及由此的价值，已导致重点放在制药公司上，以使它们各自的生产过程的生产力最大化，同时控制相关的成本。

亲和色谱，通常在包含葡萄球菌蛋白A或其变体的基质上，通常被用作在完整免疫球蛋白分子的纯化中的关键步骤之一。蛋白A对免疫球蛋白的Fc链的高选择性结合提供一个对杂质和污染物具有很高的清除作用的通用步骤。

对于抗体片段，例如Fab、单链可变片段(scFv)、双-特异性T-细胞衔接子(BiTE)、结构域抗体等，其缺乏Fc链但具有1、3或4子类κ轻链，包含源自大消化链球菌(Peptostreptococcus magnus)的蛋白L的基质(B Åkerström, L Björck: J. Biol.Chem. 264, 19740-19746, 1989；W Kastern et al: J. Biol. Chem. 267, 12820-12825, 1992；B H K Nilson et al: J. Biol. Chem. 267, 2234-2239, 1992和美国专利6,822,075)显示作为提供所需的高选择性的纯化平台的巨大前景。美国专利6,822,075中公开的蛋白L包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1加上在N-末端的另外的AVEN序列。

SEQ ID NO: 1 (蛋白L)

KEETPETPETD SEEEVTIKAN LIFANGSTQT AEFKGTFEKA TSEAYAYADT LKKDNGEYTVDVADKGYTLN IKFAGKEKTPEE PKEEVTIKAN LIYADGKTQT AEFKGTFEEA TAEAYRYADALKKDNGEYTV DVADKGYTLN IKFAGKEKTPEE PKEEVTIKAN LIYADGKTQT AEFKGTFEEATAEAYRYADL LAKENGKYTV DVADKGYTLN IKFAGKEKTPEE PKEEVTIKAN LIYADGKTQTAEFKGTFAEA TAEAYRYADL LAKENGKYTA DLEDGGYTIN IRFAGKKVDEKPEE

蛋白L基质是可作为Capto^TM L从GE Healthcare Bio-Sciences AB, Sweden(Capto L data file 29-0100-08 AC, 2014)经商业获得的，并可被用来分离含κ轻链的蛋白例如完整抗体、Fab片段、scFv片段、结构域抗体等。由健康人产生的约75%的抗体具有κ轻链，并且许多治疗性单克隆抗体和抗体片段含有κ轻链。

任何生物处理色谱应用需要全面注意污染物的明确去除。这样的污染物可以是例如在色谱程序中吸附于固定相或基质的非-洗脱的分子，例如非-期望的生物分子或微生物，包括例如蛋白、碳水化合物、脂质、细菌和病毒。从基质除去这样的污染物通常在首次洗脱期望的产物后执行，以在后续使用之前再生基质。这样的除去通常涉及称为原位清洗(CIP)的程序，其中能够从固定相洗脱污染物的试剂被使用。一类常常与色谱介质一起使用的这样的试剂是在基质上通过的碱性溶液。目前最广泛使用的清洁和消毒剂是NaOH，并且理想的是以范围从0.05至最多例如1 M的浓度使用，这取决于污染的程度和性质。然而，与例如蛋白A比较，蛋白L是一种对碱相当敏感的蛋白并且在大量的周期后仅耐受至多约15mM NaOH。这意味着另外的、不太理想的清洁溶液，例如尿素或胍鎓盐，也可能必须使用，以确保足够的清洁。