[发明专利]蛋白质制造方法

权利要求书

1.一种制造抗体或其抗原结合片段的方法，其包括：

a)在使得大肠杆菌宿主细胞在周质中表达所述抗体或其抗原结合片段的条件下培养所述大肠杆菌宿主细胞，

b)从含有宿主细胞和其它污染物的混合物中纯化所述抗体或其抗原结合片段，其中所述纯化包括至少一个色谱步骤，并且其中向所述混合物中加入还原剂，并且将所述抗体或其抗原结合片段在第一色谱步骤直到最后的色谱步骤的过程中保持在所述还原剂的存在下，

c)向所述抗体或其抗原结合片段添加PEG，和

d)回收偶联于PEG的所述抗体或其抗原结合片段，

其中所述还原剂选自谷胱甘肽，β-巯基乙醇，β-巯基乙胺，二硫苏糖醇，三(2-羧乙基)膦，半胱氨酸，及其组合，并且

其中从步骤b)中回收的蛋白质中除去所述还原剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述还原剂为0.1mM至100mM的谷胱甘肽。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述还原剂为0.5mM至2mM的谷胱甘肽。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗原结合片段是Fab’。

5.根据权利要求1所述的方法，其中PEG通过与抗体铰链中的半胱氨酸残基共价结合而偶联至所述抗体或其抗原结合片段。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述PEG分子是40,000PEG-马来酰亚胺。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b)的纯化所述抗体或其抗原结合片段包括第一色谱步骤和第二色谱步骤，所述第一色谱步骤是阳离子交换色谱，其中洗脱含有所述抗体或其抗原结合片段的第一洗脱液，所述第二色谱步骤是阴离子交换色谱以产生含有所述抗体或其抗原结合片段的流通部分。