[发明专利]应用人脂肪衍生的干细胞增殖血清来源的丙肝病毒及其用途

说明书

已经提出在肝外部位的丙肝病毒复制；然而，完全病毒复制仅在肝细胞中得到证实。在此我们显示，新鲜分离自HCV‑感染个体的人脂肪形成的DLK‑1⁺干细胞(hADSC)在体内包含病毒转录物、复制中间体和病毒抗原，在长期离体培养时病毒转录物在上清液中增加。此外，分离自HCV(‑)个体的幼稚hADSC支持临床分离株在体外的完全复制，并且感染对细胞是供体非特异性的和对病毒是跨越基因型的。病毒感染/复制通过CD81、LDL‑R、SR‑B1、EGFR、载脂蛋白E、闭合蛋白、紧蛋白‑1、NPC1L1和二酰基甘油乙酰转移酶‑1介导，并且可被抗病毒药物抑制。此外，与JFH1/HCVcc相比，hADSC增殖的病毒颗粒的物理性质更类似于临床分离株，通过体外感染的hADSC增殖的病毒对原代人肝细胞具有感染性。因此，hADSC是体内HCV贮库，代表临床病毒‑宿主相互作用的新位点。hADSC还可被开发作为生理学相关的原代细胞培养系统以增殖临床分离株。

发明领域

本发明涉及用于增殖丙肝病毒(HCV)的系统和方法以及其用途。

发明背景

HCV为黄病毒科(Flaviviridae)的包膜正链RNA病毒。它含有9.6kb基因组，其始于非翻译区(5’-UTR)，接着是编码结构蛋白(核心、E1和E2)和包括p7、NS2、NS3、NS4和NS5在内的非结构(NS)蛋白的序列(关于综述，参见参考文献^1，2)。与乙肝病毒(HBV)的感染不一样，HCV感染为具有肝内表现和肝外表现两者的多层面疾病³，并且HCV可驻留在非肝细胞^4-6，其可在病毒持续性和再活化中起一定作用。然而，研究HCV的肝外复制的体外系统严重有限。就原代细胞而言，仅在人和黑猩猩肝细胞中证明血清携带的HCV(HCVser)的直接感染，人和黑猩猩肝细胞难以在培养物中维持，并且还具有在细胞特性上显著的供体间的变化。此外，大多数体外细胞培养方法利用分子克隆，而不是天然病毒(关于综述，参见参考文献⁷)。这些模型还在非原代细胞中生长病毒，包括最近经报道支持临床HCV分离株的感染的HLZ01肝癌细胞系⁸。因此，这些数据可外推至实际临床病毒-宿主相互作用的程度仍是一个担忧。

因此，仍需要增殖血清携带的丙肝病毒(HCV)的备选系统和方法。

发明概述

提供本概述以呈现本发明的概述，从而简要地指出本发明的性质和实质。在理解其不用于解释或限制权利要求的范围或含义的情况下提出该概述。

在一方面，本公开内容提供用于增殖丙肝病毒(HCV)的基于人脂肪衍生的干细胞(hADSC)的系统，其包括hADSC、适于培养hADSC的培养基和HCV。在一些实施方案中，hADSC为原代细胞或传代细胞，优选第1-15代细胞，更优选第1-6代细胞。在一些实施方案中，hADSC对特异性标记物DLK-1(即Pref-1)呈阳性。在一些实施方案中，HCV来源于感染HCV的个体的血液、血清、血浆或体液，或为临床HCV分离株。在一些实施方案中，HCV具有选自以下的基因型：1a、1b、2a、2b、2c、2d、3a、3b、3c、3d、3e、3f、4a、4b、4c、4d、4e、4f、4g、4h、4i、4j、5a和6a以及其任何组合，优选基因型1a、1b、2a、2b或混合的2a+2b。在一些实施方案中，所述系统支持HCV的完全复制，包括感染病毒的产生。