[发明专利]干细胞材料及制备方法

权利要求书

1.保藏于俄罗斯国家工业微生物保藏中心(VKPM)的间充质干细胞系，登录号为H-154。

2.一种间充质干细胞系，当将0.7×10⁶个细胞接种到75cm²培养瓶中并培养至少96小时时，所述间充质干细胞系具有以下特征中的至少一个：(a)在更换培养基后24小时内，所述细胞产生至少4.5mM的乳酸盐；(b)在更换培养基后24小时内，所述细胞产生至少150pg/ml的GRO/KC；(c)在更换培养基后24小时后，所述细胞产生低于250pg/ml的OPG；或者(d)在更换培养基后24小时后，所述细胞产生低于80pg/ml的TGF-β3。

3.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞来源于骨髓。

4.权利要求3所述的干细胞系，其中所述细胞来源于Wistar大鼠的骨髓。

5.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞在低于7.05的pH时至少进行一次群体倍增。

6.权利要求2所述的干细胞系，其中当将0.7×10⁶个细胞接种到75cm²培养瓶中并培养至少150小时时，所述细胞具有以下附加特征中的至少一个：(e)在更换培养基后24小时内，培养基的pH值降至7.0以下；或者(f)在更换培养基后24小时内，培养基的pH值与不含细胞的培养基的pH值相比下降至少0.4个单位。

7.权利要求6所述的干细胞系，其中所述干细胞在补充有5％CO₂的RPMI-1640培养基中培养。

8.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞在更换培养基后24小时内产生至少460pg/ml的GRO/KC。

9.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞在更换培养基后24小时后产生低于90pg/ml的OPG。

10.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞在更换培养基后24小时后产生低于40pg/ml的TGF-β3。

11.权利要求2所述的干细胞系，具有权利要求2中所述特征中的至少两个。

12.权利要求2所述的干细胞系，具有权利要求2中所述特征中的至少三个。

13.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞的特征表现为CD29和CD44标志物的表达呈阳性以及CD11b和CD45标志物的表达呈阴性。

14.权利要求2所述的干细胞系，其中所述细胞中的至少90％表现出2n＝42的核型。

15.一种条件培养基，通过包括以下步骤的方法制备：

提供培养基；

将来自权利要求1所述的干细胞系的多个干细胞在培养基中保持一个调节期，从而调节所述培养基；以及

收集条件培养基。

16.一种条件培养基，通过包括以下步骤的方法制备：

提供培养基；

将权利要求2所述的细胞在培养基中保持一个调节期，从而调节培养基；以及

收集条件培养基。

17.权利要求16所述的条件培养基，其中所述培养基是补充有5％CO₂的RPMI-1640。

18.权利要求16所述的条件培养基，其中所述细胞保持在CO₂的大气浓度下。

19.权利要求16所述的条件培养基，其中所述细胞保持在缺氧条件下。

20.权利要求16所述的条件培养基，其中所述细胞来源于Wistar大鼠的骨髓。

21.权利要求16所述的条件培养基，其中所述调节期为至少12小时。

22.权利要求16所述的条件培养基，其中所述调节期是足以使条件培养基含有至少150pg/mL的GRO/KC的时间段。

23.一种条件培养基，包含：由多个间充质干细胞调节的培养基，其中所述条件培养基包含以下中的至少一种：(a)至少500pg/mL的GRO/KC；(b)至少4000pg/ml VEGF；(c)低于250pg/ml的OPG；或者(d)低于80pg/ml的TGF-β3。