[发明专利]用于检测患者样品中的生物制品的间接均相迁移率变动试验

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2014年12月5日提交的美国临时申请No.62/088,465,2015 年2月6日提交的美国临时申请No.62/113,317和2015年5月8日提交的美国临时申请No.62/158,791的优先权，将其公开内容以其整体按引用并入本文中用于所有目的。

发明背景

炎性肠病(IBD)发生于全世界并且影响数百万人，是用于描述未知病因的胃肠道失调的集合术语：克罗恩病(CD)、溃疡性结肠炎(UC)和未定型结肠炎(IC)。IBD与肠易激综合征(IBS)合在一起，全部美国人的一半在生命过程中受到其影响，对于IBD，支出超过$26亿美元，而对于IBS，超过$80亿美元。导致这些高医疗成本的一个主要决定因素是难于诊断消化系统疾病和这些疾病的进展。生产力的丧失会加剧IBD和 IBS的成本支出，患有这些病症的人每年比国家平均数多丢失至少8天的工作日。

尽管抗-TNFα疗法在IBD治疗中获得成功，但仍有患者亚群难以治疗，凸显了未能满足的对新疗法的医疗需求。维多珠单抗(Vedolizumab)是消化道特异性的，α4β7整联蛋白中和性单克隆抗体，其不影响外周血细胞计数并且看起来缺乏全身性效应。维多珠单抗是一种用于管理难治性患者的新的抗炎治疗可选方案。此外，优斯它单抗(ustekinumab)是IL12p40 单克隆抗体，其是另一种新的IBD治疗剂。然而，对于在IBD患者中有效使用这些新的治疗剂，需要有可用的能准确测量生物制品(如维多珠单抗和优斯它单抗)水平的诊断试验。

因此，本领域需要检测试验用于检测患者样品中的生物制品(如维多珠单抗和优斯它单抗)的存在或水平，以监控药物治疗和指导治疗决定。这样的检测试验特别可以用于监控药物功效和相应地优化疗法从而通过个性化方案对疾病(如，溃疡性结肠炎和克罗恩病)实现治疗管理，这样的检测试验可以包括评价疾病过程和临床参数，如药效动力学、疾病活动指数、疾病负荷和炎症生物标志物。本发明满足了这种需求并且还提供了相关的优势。

发明简述

本发明提供了新的用于检测和测量样品中生物制品的存在或水平的间接均相迁移率变动试验(indirect homogeneous mobility shift assay)。本发明的试验尤其可以用于检测和测量靶向复杂抗原的生物制品的存在或水平，所述抗原包括细胞表面蛋白、跨膜蛋白、高度糖基化蛋白、多聚体蛋白等。由此，本发明可以提供信息用于指导针对接受生物制品治疗的受试者作出的治疗决定、以及在优化治疗、降低毒性和/或监控生物疗法的治疗功效方面改善准确度。本发明还提供，适用于本文所述试验的分离的可溶性α4β7整联蛋白杂二聚体和分离的可溶性IL-12p40单体。

在某些方面中，本发明提供，用于测定样品中生物制品的存在或水平的方法，该方法包括：

(a)将样品接触可以结合生物制品的未标记的可溶性抗原，以在抗原和样品中的生物制品之间形成未标记的复合物；

(b)将来自步骤(a)的样品接触标记形式的生物制品，以在抗原和标记的生物制品之间形成标记的复合物；

(c)将未标记和标记的复合物进行大小排阻色谱，以将未标记和标记的复合物与游离的标记生物制品分离，并检测游离的标记生物制品的量；和

(d)将步骤(c)中检测到的游离的标记生物制品的量与已知量的生物制品的标准曲线进行比较，由此确定样品中生物制品的存在或水平。

在一些实施方案中，生物制品包括抗体、抗体片段、蛋白、多肽、肽、融合蛋白、多价结合蛋白、抗体-药物缀合物、疫苗、核酸、糖、其重组形式、其工程化形式及其组合。

在某些实施方案中，抗原是膜结合蛋白、糖基化蛋白、多聚体蛋白、不溶性蛋白、难以表达或纯化的蛋白和/或大蛋白的可溶形式(例如，可溶性片段、变体，或单体形式)。在某些情况中，抗原是膜结合蛋白的可溶性胞外结构域(例如，可溶性细胞因子受体胞外结构域)。在某些其他情况中，抗原是可溶性同源二聚体或异源二聚体，其包含两个膜结合蛋白的胞外结构域(例如，可溶性整联蛋白异源二聚体)。在再其他情况中，抗原是在分离和/或纯化后不发生多聚化并且保持单体形式的可溶性蛋白(例如，具有一个或多个半胱氨酸残基被突变以最小化或消除多聚体形成的可溶性细胞因子变体)。