[发明专利]用于检测干细胞的方法及试剂盒

说明书

本发明提供检测干细胞的方法，所述方法基于具有特定的糖链结构的未分化糖链标志物来检测干细胞，其中，作为利用凝集素与抗体的组合的高灵敏度的“凝集素‑抗体夹心法”，通过检测细胞的培养上清液或溶解物中含有的足糖萼蛋白来检测干细胞，所述方法包括下述步骤：使所述培养上清液或溶解物与对于以下(式1)或以下(式2)表示的糖链具有结合性的凝集素、和对于硫酸角质素具有结合性的抗体接触，从而形成由所述凝集素、足糖萼蛋白和所述抗体构成的复合体的步骤；和检测所述复合体的步骤。

技术领域

本发明涉及用于检测干细胞的方法及试剂盒。更详细而言，涉及通过利用凝集素-抗体夹心法检测细胞的培养上清液或溶解物中含有的足糖萼蛋白来检测干细胞的方法等。

背景技术

使用人工亚全能干细胞(iPS细胞)及胚胎干细胞(ES细胞)等具有多分化能力的干细胞(以下有时也简称为“干细胞”)的再生医疗技术的课题之一是如何防止下述风险：在使干细胞分化为期望的类型的细胞后将其移植至患者的体内时，残留有保持为未分化状态的干细胞，其与已分化的细胞一同被移植至患者的体内、在患者的体内发生肿瘤化或癌化。

作为能够用于对具有致肿瘤性潜能的未分化干细胞的混入进行评价的技术，专利文献1中公开了通过使用对于干细胞特异性糖链具有结合性的凝集素来检测该糖链从而判断细胞的分化状态的方法。该方法中，使用被称为BC2LCN凝集素的凝集素的重组蛋白(rBC2LCN凝集素)，对具有“Fucα1-2Galβ1-3GlcNAc”及/或“Fucα1-2Galβ1-3GalNAc”的糖链结构的未分化糖链标志物进行检测。需要说明的是，rBC2LCN凝集素是使与革兰氏阴性细菌(洋葱伯克霍尔德菌，Burkholderia cenocepacia)来源的BC2L-C蛋白质的N端结构域对应的BC2LCN凝集素(GenBank登记号：YP_002232818)在经转化的大肠杆菌中表达而得到的重组蛋白，其可识别上述糖链结构。

另外，专利文献2中公开了以下方法：通过使用rBC2LCN凝集素来检测干细胞的培养上清液中的上述糖链，从而对在分化诱导处理后残留的未分化的干细胞进行检测。专利文献2中，将作为复合糖的足糖萼蛋白(Podocalyxin)鉴定为具有“Fucα1-2Galβ1-3GlcNAc”及/或“Fucα1-2Galβ1-3GalNAc”的糖链结构的未分化糖链标志物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2013/128914号

专利文献2：国际公开第2013/065302号

专利文献3：国际公开第2012/147992号

非专利文献

非专利文献1：J.Am.Soc.Nephrol.,2009,Vol.20,No.8,p.1669-1676.

非专利文献2：Structure,2010,Vol.18,No.1,p.59-72.

非专利文献3：Glycobiology,2013,Vol.23,No.3,p.322-336.

非专利文献4：J.Biol.Chem.,2011,Vol.286,No.23,p.20345-20353.

非专利文献5：Stem Cells,2007,Vol.25,p.723-730.

非专利文献6：Cancer Research,1999,Vol.59,p.4715-4719.