[发明专利]cTnⅠ主要表位区的重组表达及其抗体的制备方法

权利要求书

1.一种cTnⅠ主要抗原表位区的重组表达方法，其特征在于，选取cTnⅠ蛋白的三段表位 区，分别构建表达载体pColdTF-cTnⅠN、pColdTF-cTnⅠS和pColdTF-cTnⅠC，转化表达菌株后， 诱导菌体表达cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C融合蛋白。

2.根据权利要求1所述重组表达的人cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C融合蛋白，其特征在于： cTnⅠ-N融合蛋白具有位于cTnⅠ天然蛋白的氨基端的一段表位区，具有序列表中SEQIDNo1 氨基酸序列；cTnⅠ-S融合蛋白含有cTnⅠ天然蛋白的中心稳定区，具有序列表中SEQIDNo2 氨基酸序列；cTnⅠ-C具有位于cTnⅠ天然蛋白的羧基端的一段表位区，具有序列表中SEQID No3氨基酸序列，上述cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C融合蛋白氨基端均融合有蛋白TF，TF具有序 列表中SEQIDNo4氨基酸序列。

3.根据权利要求1-2所述的cTnⅠ主要抗原表位区重组蛋白的制备方法，其特征在于，表 达质粒为pColdTF原核表达载体，诱导表达的cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C融合蛋白可利用金属 螯合亲和层析柱进行纯化。

4.根据权利要求1-3所述表达的cTnⅠ主要表位区重组蛋白，其特征在于纯化获得重组 表达cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C融合蛋白后，再将融合蛋白进行蛋白酶酶切处理；酶切后蛋白 经过离子柱纯化后获得cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C蛋白。

5.根据权利要求4所述的制备方法，所用的蛋白酶的特征在于，蛋白酶选自胰蛋白酶， 凝血酶、FactorXa、3C酶中的任何一种；上述蛋白酶包括天然提取及基因工程重组蛋白酶， 本发明中优选蛋白酶为3C蛋白酶。

6.使用上述蛋白酶进行酶切时，重组cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C融合蛋白与蛋白酶质量 比为2000:1至200:1，酶切温度为4℃，作用时间为24h-48h。

7.根据权利要求1-6所述的方法制备的cTnⅠ-N、cTnⅠ-S和cTnⅠ-C重组蛋白，可作为抗原 免疫动物，制备cTnⅠ特定区域的单抗或多抗；也可以偶联载体蛋白后进行免疫，制备cTnⅠ特 定区域的单抗或多抗，载体蛋白可选择BSA、KLH、OVA中任一种。