[发明专利]一种抗氧化药物筛选试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于所述试剂盒含有以下试剂：

①、试剂A：秀丽隐杆线虫悬液；

②、试剂B：线虫培养基；

③、试剂C：大肠杆菌OP50；

④、试剂D：2′,7′二氯氢化荧光素乙二脂。

2.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有多孔板，该多孔板为黑色，带有封口膜。

3.根据权利要求2所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于：所述多孔板为384孔微孔板。

4.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于，所述试剂A的浓度为50条秀丽隐杆线虫/20μl，试剂C的浓度为10mg大肠杆菌/ml，试剂B的体积为25ml。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于，所述秀丽隐杆线虫的株系为野生型N2。

6.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于，所述试剂A中的秀丽隐杆线虫为经同步化后，孵化至L1期的秀丽隐杆线虫，秀丽隐杆线虫同步化的步骤如下：用M9缓冲液将平板上的秀丽隐杆线虫冲下来，将冲洗液吸入离心管；4000rpm离心3min，去除上清；加入裂解液；在涡旋仪上震荡7min，使秀丽隐杆线虫的虫体破裂释放卵；4000rpm/离心3min，去除上清，收集沉淀获得大量的秀丽隐杆线虫卵；M9缓冲液冲洗两次，再加入1ml M9缓冲液，置于20℃培养箱中孵化48小时，获得同步化后孵化至L1期的秀丽隐杆线虫。

7.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于：所述试剂C为含有大肠杆菌OP50活菌的冻干粉或菌液。

8.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒，其特征在于：所述试剂B为S液培养基。

9.一种如权利要求1-7所述的抗氧化药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的使用方法如下：

（1）采用抗氧化药物筛选试剂盒筛选抗氧化药，设定空白对照组和药液测定组，将多孔板中的每一孔设置为一个独立的实验单元；

（2）药液测定组，在无菌条件下将试剂B、含有待测药液的溶液、5μl 试剂C以及20μl试剂A依次加入多孔板的孔中，使得每孔总体积均为50μl，设定四个平行；

（3）空白对照组，在无菌条件下将试剂B、与待测药液的溶液等量的无菌水或溶媒、5μl 试剂C以及20μl试剂A依次加入多孔板的孔中，使得每孔总体积均为50μl，设定四个平行；

（4）加样完成后用封口膜将多孔板密封，并将其置20℃恒温摇床中震摇培养96小时；

（5）向所有加样孔中依次加 2′,7′二氯氢化荧光素乙二脂，使2′,7′二氯氢化荧光素乙二脂的终浓度为100μ M，20℃恒温处理30min；

（6）用荧光酶标仪在激发光504nm，发射光529nm条件下测定多孔板中各处理组的荧光值，荧光值即代表活性氧水平；

（7）采用统计软件对实验数据进行处理、分析，如果药液测定组的活性氧水平低于空白对照组，则证明待测药物具有抗氧化活性；如果药液测定组的活性氧水平与空白对照组无显著性差异，则证明待测药物不具有抗氧化活性；以此评价待测药物的抗氧化活性。

10.如权利要求8所述的抗氧化药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤（3）中所述有机溶媒的溶液为DMSO、乙醇。