[发明专利]转基因玉米IE034外源插入片段3’端旁侧序列及检测方法有效
| 申请号： | 201610009212.5 | 申请日： | 2016-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN105543238B | 公开（公告）日： | 2020-04-07 |
| 发明（设计）人： | 杜智欣;付伟;魏霜;乾义柯;王晨光;朱鹏宇;王国英;朱水芳 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100176 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 玉米 ie034 插入 片段 旁侧 序列 检测 方法 | ||
1.用于检测转基因玉米IE034外源插入片段3'端旁侧DNA序列的特异性PCR检测引物及探针，其特征在于，所述3'端旁侧DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物的核苷酸序列为：
上游引物：5'-CACTCCGCATACAGCTCGATAATCT-3'，
下游引物：5'-TATGGTCTTCTTGCTTCGTGCTTTT-3'；
探针为：5'-F-TACTCTTCCGAGCAAAGGACGCC-Q-3'。
2.根据权利要求1所述的引物及探针，其中，F为FAM、HEX、TET、JOE、VIC、FITE、CY3或CY5；Q为TAMRA、ROX、DABCY、BHQ1或BHQ2。
3.一种转基因玉米IE034的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1或2所述引物及探针。
4.一种转基因玉米IE034的检测方法，其特征在于，所述方法包括：以样品总DNA为模板利用权利要求1或2所述的引物及探针进行实时荧光PCR扩增反应，检测扩增反应产物中是否具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR扩增的反应程序为：95℃10min；95℃15sec，60℃60sec40个循环。
6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其特征在于，实时荧光PCR扩增的反应体系为：2×GoldStar TaqMan Mixture10μl，10μM上游引物0.4μl，10μM下游引物0.4μl，10μM探针0.4μl，DNA模板2μl，加入灭菌蒸馏水至总体系为20μl。
7.权利要求1或2所述的引物及探针在检测转基因玉米IE034中的应用。
8.权利要求3所述的试剂盒在检测转基因玉米IE034中的应用。
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