[发明专利]一种用于神经损伤修复的神经支架、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于神经损伤修复的神经支架，其特征在于，包括胶原支架、培养在胶原支架上的神经干细胞、以及由肝素固定在胶原支架上的生长因子，所述的生长因子具有肝素结合域，所述肝素是通过交联溶液交联在胶原支架上的；其中，所述的交联溶液是浓度为1～25mM的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1～12.5mM的N-羟基丁二酰亚胺的混合溶液。

2.一种用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，包括如下步骤：

1)配制胶原溶液

获取动物胶原组织，将其溶解于0.05～0.1％冰醋酸-PBS(v/v)中，配制成胶原溶液；

2)冻干、灭菌

将胶原溶液倒入模具中，再将模具放入液氮冷冻，然后用冻干机冻干，冻干时间为8～12小时，得到胶原海绵，再进行灭菌处理；所述的胶原海绵为三维胶原材料，孔径为30～200μm；

3)交联、洗涤

将肝素溶解于交联溶液中，将灭菌的胶原海绵浸没于含肝素的交联溶液中进行交联，交联温度30～40℃，交联时间3～4小时，交联结束后用磷酸缓冲盐溶液洗涤4～8小时，再用去离子水洗涤4～8小时；

其中，所述的交联溶液为浓度为1～25mM的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1～12.5mM的N-羟基丁二酰亚胺的混合溶液；

4)成型

将交联后的胶原海绵吸去水分，浸没于生长因子溶液中成型，成型温度30～40℃，成型时间0.5～2小时，获得胶原支架；其中，所述的生长因子具有肝素结合域；

5)培养神经干细胞

将神经干细胞原代培养在步骤4)得到的胶原支架上，获得所述的神经支架。

3.根据权利要求2所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，步骤1)中获得的胶原溶液中胶原的浓度为5～20mg/mL。

4.根据权利要求2所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，步骤2)中利用电子束辐照对胶原海绵进行灭菌处理，处理条件为6～12kGy⁶⁰Co。

5.根据权利要求2所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，步骤3)中含肝素的交联溶液中，肝素的浓度为2～4mg/mL。

6.根据权利要求2所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，步骤4)所述的生长因子溶液中生长因子的浓度为50～500μg/mL。

7.根据权利要求2-6任一项所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，步骤4)中所述的生长因子为碱性成纤维细胞生长因子或血管内皮生长因子。

8.根据权利要求2-6任一项所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，步骤5)中将神经干细胞经Hoechst标记后，再培养在胶原支架上，神经干细胞的个数为5～10×10⁵个。

9.根据权利要求2-6任一项所述用于神经损伤修复的神经支架的制备方法，其特征在于，所获得的神经支架为神经导管或圆形、椭圆形、方形或不规则海绵状神经支架。