[发明专利]一种内皮祖细胞快速扩增体系

说明书

技术领域

本发明属于细胞扩增领域，尤其涉及一种内皮祖细胞快速扩增体系。

背景技术

内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)是血管内皮前体细 胞，能定向分化为成熟的内皮细胞，亦称血管母细胞。机体缺血时，EPCs可从 骨髓中动员进入外周血，到达缺血组织参与血管新生。把体外培养和扩增的 EPCs输入体内，提高循环中EPCs的数量和质量可促进缺血部位的血管新生。 因此，EPCs移植成为了治疗缺血性血管疾病的一条新思路。目前内皮祖细胞富 集、分离和培养的方法存在较大差异，如何培养和扩增足够数量和质量的EPCs 已成为目前研究的热点。现如今没有一种方法能有效的够培养和扩增足够数量 和质量的EPCs，严重制约了缺血性血管疾病的治疗。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种内皮祖细胞快速扩增体系，以此 解决目前不足以扩增足够数量和质量的EPCs的问题。

本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：一种内皮 祖细胞快速扩增体系，该内皮祖细胞快速扩增体系包括内皮祖细胞扩增、内皮 祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作用、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑 制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素、促红细 胞生成素、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用， 所述内皮祖细胞扩增方式分为内皮祖细胞动员作用、药物对内皮祖细胞扩增作 用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细胞扩增作用，药物对 内皮祖细胞扩增作用相关药物为羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张 素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、雌激素和促红细胞生成素。

本发明还可以采用如下技术措施：

优选的，所述内皮祖细胞动员作用具体通过粒细胞集落刺激因子、粒-巨噬 细胞集落刺激因子和干细胞因子动员。

优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体通过VEGF促进EPCs增 殖，VEGF通过细胞膜VEGFR-2受体激动蛋白激酶B，再通过三磷酸肌醇途径 激活后续信号调控EPCs的增殖。

优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体通过高密度脂蛋白，促 进局部缺血组织的血管生成，其机制是通过三磷酸肌醇途径通路直接刺激EPC 增殖。

优选的，所述刺激因子对内皮祖细胞扩增作用具体可通过运动、缺氧、血 管流切力、某些疾病状态都能刺激体内EPCs的快速增殖。

优选的，所述转基因对内皮祖细胞扩增作用具体为转导VEGF对EPC增殖。

优选的，所述的内皮祖细胞通过以下方法获得：

步骤一、将多能干细胞于第一培养基中诱导分化形成中内胚层前体细胞；

步骤二、将所述中内胚层前体细胞于第二培养基中诱导分化形成血管内皮 细胞祖细胞；

步骤三、进行血管内皮细胞祖细胞集落数及细胞功能的鉴定：鉴定细胞形 态、功能及细胞表面分子的表达。

优选的，所述的第一培养基含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸 氢钠、维生素C、胰岛素、激活素A、骨形成蛋白4、糖原合成酶激酶-3抑制剂； 所述培养基B含有DMEM培养基、F12培养基、硒酸钠、碳酸氢钠、维生素C、 胰岛素、血管内皮生长因子和转化生长因子β信号通路抑制剂。

本发明具有的优点和积极效果是：本发明通过内皮祖细胞动员作用、药物 对内皮祖细胞扩增作用、刺激因子对内皮祖细胞扩增作用和转基因对内皮祖细 胞扩增作用能扩增足够数量和质量的EPCs，为缺血性血管疾病的治疗提供了保 障。

附图说明

图1是本发明实施例提供的一种内皮祖细胞快速扩增体系的结构框图。

图中：1.内皮祖细胞扩增、2.内皮祖细胞动员作用、3.药物对内皮祖细胞 扩增作用、31.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、32.血管紧张素Ⅱ受体拮抗 剂、33.血管紧张素转化酶抑制剂、34.雌激素、35.促红细胞生成素、4.刺激因 子对内皮祖细胞扩增作用、5.转基因对内皮祖细胞扩增作用。

具体实施方式

为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并 配合附图详细说明如下。

请参阅图1：