[发明专利]防治核桃炭疽病的生防菌株及其筛选方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于防治核桃炭疽病的生防菌株技术领域，具体涉及一种防治核桃 炭疽病的真菌生防菌株及其筛选方法与应用。

背景技术

近些年随着云南省政府大力发展核桃种植，各地依托当地优势资源积极发 展核桃产业。该省的核桃生产在全国核桃生产中占有非常重要的地位，其核桃 的栽培面积和产量约占全国的1/3，作为云南省重要的木本油料植物，核桃在改 善当地人们生活水平，提高社会效益方面发挥着重要作用。大理州漾濞彝族自 治县作为云南省五个“全国经济林核桃之乡”之一，其种植核桃具有较为悠久 的历史，核桃产量、品质均居云南省首位。然而，核桃炭疽病作为近几年来核 桃上的重要真菌病害，严重危害着当地核桃产业的健康、有序、快速发展。据 近些年对漾濞核桃产区核桃炭疽病的病害调查结果，严重年份该病发生率高达 90％以上，对当地核桃的生产造成较为严重的经济损失。

限于生产上对于该病害的防治措施主要依赖于化学药剂，而病原菌抗药性 逐年显现，急需开发适合生产的优良药剂。目前，学术界对于化学药剂的替代 品生防菌的研究逐年增加，对生防菌的筛选工作多集中于对农作物、蔬菜等方 面的报道上。就核桃炭疽病的生防菌筛选而言，王清海,牛赡光,刘幸红,等.核 桃炭疽病高效生防菌株鉴定及抑菌活性[J].山东农业大学学报(自然科学版), 2011,(3):335-337报道了研究发现短芽孢杆菌PF-2对该菌的抑菌率最高，为 88.47％，还有三株均属于芽孢杆菌属的细菌也对核桃炭疽病菌具有83％以上的 抑菌率，尽管如此，对于可作为核桃炭疽病的生防真菌的研究尚未见报道。

发明内容

为解决现有核桃炭疽病防治主要依赖化学药剂的问题，本发明提出一种防 治核桃炭疽病的生防菌株，该生防菌株为真菌，其对核桃炭疽病菌均有80％以 上的抑菌活性，并且稳定性好。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种防治核桃炭疽病的生防菌株，为钩状木霉(Trichodermahamatum) YB-4-15，保藏单位：中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，简称： CGMCC，保藏日期：2015-12-07，保藏号：CGMCCNo.11809。

进一步，所述生防菌株菌丝对光照条件不敏感，孢子产生需要光照条件。

进一步，所述生防菌株菌丝生长的适宜温度为12-28℃，适宜pH值为4-8。

进一步，所述生防菌株生长的培养基为PDA培养基。

本发明的另一个目的是提供一种防治核桃炭疽病的生防菌株的筛选方法， 包括以下步骤：

1)土壤微生物分离及指示菌株

选择大理州漾濞县光明村发病不同的核桃植株根际土壤，铲去表土层，取 10-15cm处土样，采用土壤稀释平板法进行分离，28℃的恒温培养箱培养2-3d (天)后，纯化长出的菌株，再将纯化菌株放入4℃冰箱保存备用；指示菌株为 胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)；

2)生防菌株筛选

初筛：将步骤1)的土壤纯化菌株以及指示菌株接种于PDA平板进行活化， 采用平板对峙培养法进行筛选，即将一块直径为6mm的指示菌株置于PDA平 板中央，在距中央一定距离的圆周上等距离接4块直径为6mm土壤纯化菌株， 记录指示菌株直径，筛选出效果较好的菌株得到初筛菌株；

复筛：一块指示菌株置于PDA平板中央，在距中央一定距离的圆周上等距 离接2块初筛菌株，筛选出对指示菌株抑制作用效果明显、稳定的生防菌株。

本发明的再一个目的是提供一种防治核桃炭疽病的生防菌株在制备防治核 桃炭疽病菌剂方面的应用，将生防菌株接种于含牛肉浸膏的马铃薯葡萄糖液体 培养基中进行发酵，将发酵液进行离心，上清液用细菌过滤器过滤，即得无菌 滤液菌剂。

进一步，所述牛肉浸膏的含量的质量百分数为0.5％。

进一步，所述发酵温度为28℃，所述液体培养基的pH值为7。

进一步，所述无菌滤液菌剂抑菌处理温度为12-45℃。

进一步，所述无菌滤液菌剂抑菌处理温度为28-30℃。

本发明的有益效果：