[发明专利]一种利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法

权利要求书

1.一种利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于该方法是利用微通道的受限空间使超分子凝胶的三维结构发生改变，以更好地保护大鼠胰岛细胞，具体是：将低分子量的凝胶因子溶于细胞培养基中，待其溶解后制备得到含有一定量凝胶因子的大鼠胰岛细胞悬浮液；然后将此大鼠胰岛细胞悬浮液导入微通道中，并置于3～5℃冰水浴中使其发生凝胶化，随后再将冻存保护剂导入微通道中，使冻存保护剂缓慢渗透到细胞中，并将冻存有大鼠胰岛细胞的微通道装置置于程序降温盒中放入-75～-85℃冰箱中冻存；

所述的微通道装置由微通道(5)和载玻片(6)组成，微通道管道宽为200～280μm，深度为115～225μm；

所述的低分子量凝胶因子为氨基酸类凝胶因子。

2.根据权利要求1所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于所述的微通道装置由软刻蚀法制备得到，具体是：将聚二甲基硅氧烷前聚体与固化剂按质量比例10:1混合均匀后倒在刻有微通道图形的硅晶片上，抽真空除去聚二甲基硅氧烷中的气泡后放入恒温60℃加热2～3h至微通道完全形成；随后，将刻有微通道图形的聚二甲基硅氧烷与硅晶片分离，并将微通道的入口和出口打通，随后将其与干净的载玻片一起用等离子表面处理机进行处理；处理完成后，迅速将载玻片和聚二甲基硅氧烷粘在一起；将粘结好的聚二甲基硅氧烷和载玻片放置恒温60℃固化2h，微通道装置制作完成。

3.根据权利要求1所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于所述的细胞培养基为RPMI1640培养基。

4.根据权利要求1所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于所述的冻存保护剂为渗透性冻存保护剂。

5.根据权利要求4所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于所述的渗透性冻存保护剂，采用二甲基亚砜。

6.根据权利要求1所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于所述的冻存保护剂是由渗透性冻存保护剂和非渗透性冻存保护剂组成的混合液，二者质量配比为1：0.16。

7.根据权利要求6所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于所述的渗透性冻存保护剂为二甲基亚砜，非渗透性冻存保护剂为海藻糖。

8.根据权利要求1所述的利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，其特征在于：将冻存有大鼠胰岛细胞的微通道装置从冰箱中取出在37℃进行复温，当温度高于超分子凝胶相转变温度时，超分子凝胶转变为液态，然后将大鼠胰岛细胞从微通道中导出，用于测试其的活性和功能。