[发明专利]一种利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞低温冻存技术领域，具体是一种利用微通道低温冻存大鼠胰岛细胞的方法，该方法是将含有氨基酸类凝胶因子的大鼠胰岛细胞悬浮液导入微通道中，使其在微通道受限空间中自组装形成具有纤维状三维网络结构的超分子凝胶，进而在低温冻存过程中保护大鼠胰岛细胞，减小细胞冷存损伤。

背景技术

糖尿病是常见的内分泌疾病，据国际糖尿病联盟公布数据显示，全球糖尿病患者目前已达3.82亿人，而我国糖尿病患病人数居全球之首，占全球患者总数的三分之一。细胞移植是治疗糖尿病的有效手段。但是由于每一次分离得到的活体细胞数量很难满足一次临床移植的需要，因此胰岛细胞的保存是胰岛移植需要研究的重要课题。

低温冻存是目前保存细胞或组织最普遍的方法，即往含有活细胞或组织的培养液中加入一定量的冻存保护剂，然后以一定的速率降至某一温度，并将活细胞或组织保存在该温度下一定时间。在冻存过程中，细胞内的新陈代谢被抑制，细胞或组织的活性“暂停”，所以细胞或组织得以长期保存，待需要使用时再将其复温，细胞或组织的活性和功能可恢复正常。关于胰岛的冷冻保存国内外已有相关的文献报道(如：文献[1]Carlos A.Agudelo,Hiroo Iwata.The development of alternative vitrification solutions for microencapsulated islets[J].Biomaterials,2008,29:1167-1176；文献[2]Stephan Schneider,Harald H.Klein.Long-term graft function of cryostored alginate encapsulated rat islets[J].Eur J Med Res,2011,16:396-400.；文献[3]Liu F.,Tian W.C.,Yang Y.A.,Zhang Q.,Zhu M.M.,Yang L.,Yang L.,Li J.,Liu J.,Wu P..Optimal method for short-term or long-term islet preservation:comparison of islet culture,cold preservation and cryopreservation[J].Journal of Artificial Organs,2014,17(4):337-343.)，目前的方法主要有玻璃化冷冻保存和慢速冷冻保存两种。在低温冻存过程中，细胞内外形成的冰晶会对大鼠胰岛细胞造成损伤，而且在冻存保护剂添加过程细胞内外渗透压的变化也会对细胞造成伤害。虽然这两种方法能在一定程度上降低细胞受到的冰晶损伤，但是在冻存过程中细胞直接或间接地暴露在冻存保护剂中，所以细胞毒性较大，细胞的存活率和功能受到了一定的影响。