[发明专利]一种油茶粕中黄酮苷的快速制备方法

说明书

本发明首先通过乙醇提取获得油茶粕总黄酮粗提物，再经过大孔吸附树脂富集纯化、低压柱层析精制，就能分离到油茶粕黄酮苷单体。不需要大型精密设备，操作步骤简单，易掌握，尤其方法简单稳定性重复性强，且得率高，有效成分损失小，能有效的对油茶粕中活性成分黄酮单体进行分离，将为进一步放大实验和工业化生产提供了重要依据。为油茶饼粕中黄酮苷药物和保健功能产品开发提供了优质原料。

技术领域

本发明属于功能成分提取技术领域，具体涉及一种油茶粕中黄酮苷的快速制备方法。

背景技术

黄酮类化合物广泛存在于植物界，是一类重要的多酚类天然产物，是植物代谢过程中产生的一类重要天然有机化合物。黄酮类化合物在人体中具有多种生物活性，包括抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗发炎、血管舒张和抗菌等作用，多年来一直是国内外研究开发的热点。油茶籽榨油后的渣滓（俗称油茶粕）中含有丰富的三萜类植物皂苷-茶皂素，还含有其他黄酮、鞣质等生物活性物质。对于废弃物油茶粕中提取纯化黄酮的研究还比较少，经初步分析，油茶粕中黄酮主要为山奈酚糖苷类黄酮。

对于油茶粕黄酮的分离纯化多采用反复硅胶柱层析法，中压柱层析法，制备型高效液相色谱，高速逆流色谱分离纯化等进行分离纯化;陈虹霞等（陈虹霞,王成章,叶建中,周昊.油茶饼粕中黄酮苷类化合物的分离与结构鉴定[J]. 林产化学与工业，2011年2月，第31卷第1期）采用茶籽饼粕经过乙醇水溶液提取，浸膏采用甲醇溶解并冷冻后去除不溶物，通过中低压色谱制备得到黄酮苷类化合物，再进一步通过高效液相制备得到黄酮苷化合物Ⅰ和Ⅱ；专利CN201010229218.6公开了一种中压柱快速分离油茶饼粕中黄酮苷的制备方法，其采用中压柱层析加高效液相色谱制备得到纯度95%以上的黄酮苷单体两个；然而以上方法具有得率低，溶剂用量大，需反复进行和使用专业设备如中压柱，制备型高效液相色谱法，条件局限，步骤繁多，专业性强，技术难于掌握，分离量小等问题。

发明内容

本发明的目的就在于为解决现有技术的不足而提供一种操作步骤简单、不需要大型精密仪器的油茶粕中黄酮苷的快速制备方法。

本发明的目的是以下述技术方案实现的:

一种油茶粕中黄酮苷的快速制备方法，包括以下步骤：

（1）采用乙醇提取油茶粕总黄酮；得到油茶粕总黄酮提取物；

（2）大孔吸附树脂纯化：采用弱极性大孔吸附树脂动态吸附富集，15-45%乙醇动态洗脱；洗脱液浓缩后得到纯度大于85%的总黄酮；

（3）低压柱精制：采用低压硅胶层析柱，常压条件下，以乙酸乙酯:甲醇:水为洗脱液，乙酸乙酯:甲醇:水(V:V:V)=(170-230):(25-45):(8-12)；得到纯度大于89.3%的化合物I和纯度大于92.5%的化合物II；化合物I为山奈酚3-O-[2-O-β-D-木糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷（Ⅰ）；化合物II为山奈酚3-O-[2-O-β-D-半乳糖-6-O-α-L-鼠李糖]-β-D-葡萄糖苷（Ⅱ）。

步骤（3）得到的化合物I经重复步骤（3），纯度达到95%以上。

步骤（3）得到的化合物II经在甲醇中结晶，纯度达到98%以上。

步骤（1）具体为：采用体积比例为50-95%乙醇，提取温度40-70℃，提取液固比为(5-15):1（ml:g），提取次数1-4次，每次提取1-3 h，提取液减压浓缩回收乙醇，得到油茶粕黄酮粗提物。

步骤（2）大孔吸附树脂型号HZ816，颗粒度0.3-1.2。

步骤（2）具体为：将步骤（1）得到的油茶粕黄酮粗提物加水配制成浓度为3-8mg/mL的油茶粕黄酮粗提液，上柱量为6-11BV（柱体积），上柱流速为0.8-1.5 BV/h；洗脱流速为0.8-1.5BV/h，洗脱液体积为3-5BV；洗脱液减压浓缩，采用冷冻干燥得到样品纯度大于85%的总黄酮。