[发明专利]一种石油降解菌剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种石油降解菌剂；还涉及一种上述石油降解菌剂的制备方法。本发明的石油降解菌剂的制备方法，包括以下步骤：(1)将惰性柄杆菌、近平滑假丝酵母、抗酚小短杆菌、球形节细菌以及鲑色锁掷孢酵母菌种分别进行扩大培养至菌体浓度为10⁹～10¹⁰cfu/g，并按照3∶2∶2∶1∶1的质量比混合均匀，得混合菌种；(2)将混合菌种在液体发酵培养基中发酵48‑60小时；(3)离心分离得粘稠状菌体细胞；(4)将粘稠状菌体细胞和0.9％NaCl溶液和海泥浸出液混匀；(5)添加营养物质后在4℃条件下密封保存。本发明对石油的降解率高。

技术领域

本发明属于石油降解技术领域，尤其涉及一种石油降解菌剂；本发明还涉及一种上述石油降解菌剂的制备方法。

背景技术

随着石油开发、船舶运输及石油工业的日益发展，海上溢油事故频繁发生，石油污染给海洋环境和海洋生态系统带来了严重的危害，并能直接或间接的影响着人类的生存和可持续发展。据联合国环境规划署报告，每年流入海洋的石油为200万吨至2000万吨，石油污染已成为一个世界性的污染问题。2010年发生在墨西哥湾的泄油事件是美国历史上最严重的海洋污染事件之一，其所造成的生态损伤和经济损失不可估量。

溢油多发生在海上，随着风浪漂移至海岸线的油品不仅造成严重环境污染，而且由于石油烃类污染物的潜在毒性和生物积累效应会导致近岸海域环境质量和生物种类多样性指数严重下降，海洋生态系统遭受严重破坏，也会对水产业和旅游业造成巨大损失。

生物修复(Bioremediation)指利用生物特别是微生物来催化降解环境污染物，减小或最终消除环境污染的受控或自发过程，是在微生物降解基础上发展起来的新兴的环保技术。早在1972年，美国利用生物修复技术清除宾夕法尼亚州的Ambler管线泄露的汽油；之后1989年，美国大规模应用生物修复技术成功处理了阿拉斯加海滩的石油污染，从此生物修复技术开始成为环境科学的研究热点与前沿。

生物修复的机理是依靠微生物细胞的吸收氧化作用，对污染物进行分解同化，将污染有机物转变为细胞的组成部分，或者转变成H₂O和CO₂排出体外，从而实现对有机污染的修复。与动物和植物相比，微生物具有比表面积大、繁殖快、适应性强、使用范围广等优点，具有强大的降解与转化能力。目前，利用微生物进行污染环境的修复倍受国内外研究学者的重视，具体工作主要集中在寻找高效降解菌、提高污染物的可利用性以及为微生物提供更合适的环境三方面。该技术分为生物促进(biostimulation)和生物强化(bioaugmentation)两大类型。生物促进法是通过添加营养物或改变环境因子，以促进微生物的代谢能力。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，并提供一种石油降解菌剂及其制备方法，旨在通过生物修复方式对海底石油污染进行有效修复，提高石油降解能力，为解决石油污染问题提供突破点。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种石油降解菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将惰性柄杆菌、近平滑假丝酵母、抗酚小短杆菌、球形节细菌以及鲑色锁掷孢酵母菌种分别进行扩大培养至菌体浓度为10⁹～10¹⁰cfu/g，将惰性柄杆菌、近平滑假丝酵母、抗酚小短杆菌、球形节细菌以及鲑色锁掷孢酵母按照3∶2∶2∶1∶1的质量比混合均匀，得混合菌种；

(2)将液体发酵培养基高压灭菌15-30min，在无菌操作台中，向灭菌处理的液体发酵培养基中接种步骤(1)所得的混合菌种，混合菌种与液体发酵培养基的重量比为1∶10-15，将接种了混合菌种的液体发酵培养基置于恒温水浴摇床，在140rpm、27-30℃条件下连续发酵48-60小时；

(3)用酵母分离离心机离心分离除去发酵液中的水，把离心获得的粘稠状菌体充分搅拌以混合均匀，获得粘稠状菌体细胞；