[发明专利]利用SAMcell芯片检测物质对细胞增殖影响的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中利用SAMcell芯片检测物质对细胞增殖影响的方法。

背景技术

细胞增殖是活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征，是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。细胞增殖已成为评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。

EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。

目前，已经开发了一种SAMcell芯片(Self-assembledCellMicroarray，自组装细胞芯片)，该芯片在专利申请200910210565.1中公开。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何利用SAMcell芯片检测待测物质对细胞增殖的影响。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了利用SAMcell芯片检测或辅助检测待测物质对细胞增殖影响的方法。

本发明所提供的利用SAMcell芯片检测或辅助检测待测物质对细胞增殖影响的方法，包括：

1)将待测物质与明胶溶液孵育或将所述待测物质与所述明胶溶液和转染试剂孵育，得到待测转染复合物；将对照物质与所述明胶溶液孵育或将所述对照物质与所述明胶溶液和所述转染试剂孵育，得到对照转染复合物；

所述明胶溶液由明胶、纤维连接蛋白和水组成，所述明胶溶液中明胶的质量百分含量为0.25％-0.4％，纤维连接蛋白的质量百分含量为0.01％；所述对照物质对细胞的增殖无影响；

2)将所述待测转染复合物固定到SAMcell芯片上，得到固定待测物质的芯片；将所述对照转染复合物固定到SAMcell芯片上，得到固定对照物质的芯片；

3)将细胞接种到所述固定待测物质的芯片和所述固定对照物质的芯片上，在相同条件下培养，分别得到固定待测物质的细胞培养芯片和固定对照物质的细胞培养芯片，将所述固定待测物质的细胞培养芯片和所述固定对照物质的细胞培养芯片分别命名为芯片1和芯片2；统计所述芯片1和所述芯片2上的细胞数目，确定所述待测物质对所述细胞增殖的影响：如所述芯片1上的细胞数目显著大于所述芯片2上的细胞数目，所述待测物质对所述细胞的增殖具有促进作用或候选具有促进作用；如所述芯片1上的细胞数目显著小于所述芯片2上的细胞数目，所述待测物质对所述细胞的增殖具有抑制作用或候选具有抑制作用；如所述芯片1上的细胞数目等于所述芯片2上的细胞数目，所述待测物质对所述细胞的增殖没有影响或候选没有影响。

上述方法中，所述待测物质与所述对照物质均可为siRNA、质粒、DNA片段、蛋白质、多肽或小分子化合物。

上述方法中，所述待测物质可为siRNA，所述待测物质与所述明胶溶液的比例可为(1-5)μg：7.5μl(如2μg：7.5μl)。所述对照物质可为序列1和序列2所示的siRNA。

上述方法中，所述待测物质可为蛋白质，所述待测物质与所述明胶溶液的比例可为(1×10^-3-1)ng：10μl(如1×10^-2ng：10μl)。所述对照物质可为BSA。

上述方法中，所述待测物质可为小分子化合物，所述待测物质与所述明胶溶液的比例为(1×10^-3-1)μg：10μl(如5×10^-2μg：10μl)。所述对照物质可为DMSO。

上述方法中，步骤1)中所述孵育均可在室温下进行；

和/或，所述转染试剂可为Lipofectamine2000转染试剂。

上述方法中，步骤1)中所述孵育的时间可为3-10分钟(如5分钟)。