[发明专利]鉴定纯合型TT51-1和杂合型Bt汕优63的方法在审
| 申请号： | 201610032844.3 | 申请日： | 2016-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN105586407A | 公开（公告）日： | 2016-05-18 |
| 发明（设计）人： | 李允静;吴刚;万丹凤;武玉花;李俊;李晓飞;李均;朱莉 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 黄瑞棠 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 纯合型 tt51 杂合型 bt 汕优 63 方法 | ||
1.一种基于微滴式数字PCR鉴定纯合型TT51-1和杂合型Bt汕优63转基因水稻植株的方 法，其特征在于：
①收集
采用国家标准《转基因植物及其产品成分检测抗虫水稻TT51-1及其衍生品种定量PCR 方法》（农业部2122号公告—8—2014），
TT51-1引物序列：
TT51-1F：5’-AGAGACTGGTGATTTCAGCGGG-3’，
TT51-1R：5’-GCGTCCAGAAGGAAAAGGAATA-3’；
TT51-1探针序列：
TT51-1P：5’-FAM-ATCTGCCCCAGCACTCGTCCG-BHQ1-3’；
内标准基因PLD引物序列：
KVM159:TGGTGAGCGTTTTGCAGTCT，
KVM160:CTGATCCACTAGCAGGAGGTCC；
内标准基因PLD探针序列：
TM013：5’-FAM-TGTTGTGCTGCCAATGTGGCCTG-BHQ1-3’；
②微滴生成
分别以TT51-1、Bt汕优63和珍汕97A的基因组DNA为研究模板，分别利用上述引物探针 组合，将TT51-1、Bt汕优63和珍汕97A的基因组DNA用水稀释至25ng/μL的浓度，配置20μL样 品PCR反应体系，将20μL样品反应体系和70μL的油分别加入DG8catridge微滴生成卡中，平 稳放置于微滴生成仪中，生成微滴；
③PCR扩增
利用8通道排枪将生成的微滴转移至96空板内，在96孔普通PCR仪上进行PCR扩增反应；
数据读取与分析
利用微滴读取仪对完成PCR扩增的96孔板扩增数据进行读取，根据自动分析的结果，分 别计算TT51-1特异性转化事件和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数及95%置信区间；如果 TT51-1品系中TT51-1特异性转化事件和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数95%置信区间 存在重叠，判定为纯合型TT51-1；如果TT51-1衍生品系中TT51-1特异性转化事件拷贝数95% 置信区间的两倍和水稻内标准基因PLD目标分子拷贝数95%置信区间存在重叠，则判定为杂 合型Bt汕优63；所述的TT51-1是转基因抗虫水稻品种，Bt汕优63是TT51-1同常规水稻品种 珍汕97A杂交后的衍生品种。
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