[发明专利]枯草芽孢杆菌生物保鲜剂及在大黄鱼保鲜中的应用

说明书

技术领域

本发明属于水产品防腐保鲜技术，具体涉及枯草芽孢杆菌作为生物保鲜剂在大黄 鱼防腐保鲜中的应用以及保鲜防腐的方法。

背景技术

水产品是人们食品的重要组成部分，冰鲜保藏是水产在市场流通的主要方式之 一。由于水产品含有丰富的蛋白质等营养物质，容易引起腐败细菌快速生长繁殖，腐败物质 大量积累，因而极易变质，影响到水产品的质量，甚至威胁人的身体健康。因此，水产品的保 鲜方法成为目前的研究热点。目前，应用于水产品的保鲜技术主要有低温保鲜、化学保鲜、 气体保鲜、辐射保鲜和生物保鲜等。生物保鲜以其安全性高、能耗低的优势成为开发新热 点。植物源保鲜剂主要起抗氧化作用；动物源抑菌剂如鱼精蛋白；水产品中常用的微生物源 抑菌剂主要有乳酸菌产生的乳酸菌素、纳它霉素等。动/植物来源的保鲜剂受原料限制，价 格较高；而目前产业化的微生物源保鲜剂均为微生物代谢物，日益受到重视。

枯草芽孢杆菌菌株具有抑制病原菌和微藻的活性，被允许使用在果蔬、鱼饲料中。

发明内容

本发明的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌作为生物保鲜剂在水产品保鲜防腐中 的应用，为水产品特别是冰鲜大黄鱼的保鲜提供新的途径。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本应用中所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillussubtulis）BSh0851，保藏日期 为2009年12月13日，保藏单位是中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地 址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.3502。

所述枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）为革兰氏阳性菌，芽孢椭圆到柱状，位于 菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大，菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，常形成 皱醭；需氧菌，可利用蛋白质、多种糖及淀粉，V-P阳性。

采用优化培养后的培养条件，通过液体发酵制得含有高活性物质的发酵液，并采 用酸沉淀的方法得到脂肽类活性物质粗提物。粗提物产量为0.45g/L，对105cfu/mL嗜冷杆 菌、105cfu/mL假单胞菌和105cfu/mL希瓦氏菌3菌混合液的抑菌率为33%。

将0.3mg/mL粗提物与0.3mg/mL尼萨普林和20mg/mL壳聚糖盐酸盐配伍，制成混合 保鲜剂。使用本发明的保鲜剂对大黄鱼进行保鲜，储藏5天后，挥发性盐基氮（TVB-N）和微 生物以及感官指标均符合我国鲜大黄鱼等相关卫生标准（SC/T3101-2010）中一级鲜度，防 腐保鲜效果显著，延长了大黄鱼的货架期。结果表明枯草芽孢杆菌发酵液粗提物能够有效 地抑制大黄鱼表面细菌的生长，同时对大黄鱼鱼肉的脂肪酸氧化和新鲜度也有一定的改善 效果。

大黄鱼保鲜方法是用碎冰将鲜活大黄鱼失活，将枯草芽孢杆菌粗提物、尼萨普林、 壳聚糖盐酸盐溶液混合喷洒在鱼体，于4℃冰箱内冰上贮藏。

具体包括以下步骤：（1）种子液制备：从营养琼脂斜面培养基上挑取一接种环已 活化的枯草芽孢杆菌接种到种子培养基中，37℃，200r/min，培养24h；种子培养基为牛肉膏 3g、氯化钠5g、蛋白胨10g、蒸馏水1000mL、pH7.0-7.2；

（2）发酵液培养基制备：酵母浸膏14g，无水葡萄糖14g，MgSO₄1g，蒸馏水1000mL，pH7.0；

（3）枯草芽孢杆菌无菌体发酵液的制备：在步骤（2）制得的发酵液中接入步骤（1）制得 的种子液，接种量为7%；调节初始pH值8；培养温度38℃，转速100r·min^-1，装液量150mL/ 250mL摇瓶；在此条件下培养24h；

（4）无菌发酵液的制备：将步骤（3）所述枯草芽孢杆菌培养液在10000r/min离心15min 后，用0.22μm滤膜过滤，即为无菌体的发酵滤液；

（5）发酵液粗提物制备：将步骤（4）所述无菌发酵液用2mol/L的HCl调至pH2.0，于4℃放 置3d，再次10000r/min离心10min，收集沉淀物，溶解于无菌水中，并用NaCl调节pH至7；