[发明专利]一种基于荧光PCR法联合检测登革热病毒及基孔肯亚病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种联合检测登革热病毒及基孔肯亚病毒的试剂盒，所述试剂盒包括针对登革热病毒的特异性引物、登革热病毒探针、针对基孔肯亚病毒的特异性引物以及基孔肯亚病毒探针，所述针对登革热病毒的特异性引物包括正向引物和反向引物，针对登革热病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，针对登革热病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述针对基孔肯亚病毒的特异性引物包括正向引物和反向引物，针对基孔肯亚病毒的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，针对基孔肯亚病毒的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述登革热病毒探针的探针序列如SEQ ID No.5所示，所述基孔肯亚病毒探针的探针序列如SEQ ID No.6所示。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述登革热病毒探针和基孔肯亚病毒探针两端标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述登革热病毒探针5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，所述基孔肯亚病毒探针5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述登革热病毒探针上标记的荧光报告基团和基孔肯亚病毒探针上标记的荧光报告基团不相同且荧光波长不相同。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA抽提试剂、RT-PCR试剂、内部对照体系和阳性对照中的一种或多种的组合。

7.一种登革热病毒和基孔肯亚病毒的联合检测方法，使用如权利要求1-6任一权利要求所述的试剂盒，具体包括如下步骤：

1)标本的核酸提取：使用病毒RNA抽提试剂盒提取标本RNA；

2)核酸荧光PCR检测混合液的配制：将针对登革热病毒的特异性引物、登革热病毒探针、针对基孔肯亚病毒的特异性引物、基孔肯亚病毒探针、内部对照品探针、RT-PCR预混液、工艺用水组成核酸荧光PCR检测混合液体系；

3)试剂配制：将核酸荧光PCR检测混合液体系、内部对照品、RT-PCR酶振荡混匀、离心；

4)加样：将步骤3所得混合液置于PCR管中，然后将步骤1所得标本、阳性对照品、DEPC-H₂O分别加入PCR管中，离心后立即进行PCR扩增反应；

5)通过定量荧光PCR仪器对样品进行PCR反应，并通过荧光信号的强度判断登革热病毒和基孔肯亚病毒的阳性和阴性。