[发明专利]一种提高重组大肠杆菌产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺能力的方法

权利要求书

1.一种提高含有重组DNA的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统活性的方法，其中含有 重组DNA的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统是通过将氨基酸酯酰基转移酶的编码基因 SAET与多药外排转运蛋白的编码基因ydeE重组到载体上并转入微生物细胞共表达，得到具 有显著提高L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物活性的重组微生物。

2.权利要求1所述的重组微生物中的两个基因共表达策略，可以是重组于同一个载体 上的两个基因的共表达，也可以是分别重组于两个不同抗性载体的两个基因的共表达。

3.权利要求1所述的重组微生物中，编码多药外排转运蛋白的基因是来自大肠杆菌的 ydeE基因。

4.权利要求1所述的增强L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统活性的方法，其特征在于 通过导入ydeE以及SAET并增加重组微生物中两个基因的拷贝数来实现的。

5.权利要求4所述的增加ydeE以及SAET在重组微生物中的拷贝数的方法，其特征是 将两个基因连接重组到一个或两个多拷贝质粒上来实现。

6.权利要求2、5所述的载体、多拷贝质粒包括但不局限于pAMP、pET-28a、pUC19、 pET-21a等。

7.L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的生产方法，其特征是将权利要求1、2、3、4、5所述的重组微 生物在培养基上培养，将得到的培养物、菌体或者它们的处理物作为酶源，在一定pH值的 水溶液中，作用于游离的L-谷氨酰胺和L-丙氨酸甲酯盐酸盐，生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，再 从该水性介质中提取生成的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。

8.权利要求1、2、3、4、5所述的重组微生物包括但不局限于大肠杆菌属、棒状杆菌 属、假单胞菌属、芽孢杆菌、酵母菌等。

9.权利要求8所述的大肠杆菌属包括但不局限于正常大肠杆菌与其基因敲除菌。