[发明专利]一种用于培养链式激活的免疫细胞的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种用于培养链式激活的免疫细胞的试 剂盒。

背景技术

随着现在分子生物学技术和肿瘤免疫学的发展，肿瘤生物治疗已成为继手术、放 疗和化疗后的第四种肿瘤治疗模式，以其安全有效、副作用小及适应症广等优点逐渐被广 大医务工作者、患者及家属接受。肿瘤生物治疗首先采集病人自身的免疫细胞或应用干细 胞，体外培养、激活、扩增，使其具有强大的识别和杀伤肿瘤细胞的能力，然后回输到病人体 内，直接杀伤肿瘤细胞，同时激发自身免疫功能，达到治疗肿瘤的目的。链式激活的免疫细 胞(CascadePrimedImmunecells,下简称CAPRI细胞)治疗是肿瘤生物治疗的非常重要的 治疗方法，CAPRI细胞疗法的效应细胞包括：NK细胞、NKT细胞、DC细胞、以及CD4+的T辅助细 胞(Th)和CD8+的细胞毒T细胞(CTL)，后两者是主要的杀伤效应细胞，在数量方面，Th和CTL 细胞约占总数的80％，其余占20％。CAPRI细胞治疗适用于早、中、晚各期肿瘤病人，可应用 于肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肠癌、脑瘤、黑色素瘤、前列腺癌、头颈部肿瘤、食道癌、肾癌、 肝癌、膀胱癌、宫颈癌、子宫内膜癌、胆囊癌、肉瘤、皮肤癌等二十多种实体肿瘤和血液肿瘤 (T淋巴细胞瘤除外)的治疗。

传统的CAPRI细胞培养的方法包括以下几个步骤：

①起始的CD3激活阶段(2-4小时)；

②IL2辅助阶段(2-3小时)：加入20单位的IL₂/ml；

③引发阶段(18-24小时)

④扩充阶段(72小时)：细胞因子加入20单位/ml的IL₂

传统的CAPRI细胞培养的方法存在以下缺陷：

①传统的培养方法细胞增殖能力差，最后获CAPRI细胞仅扩增2-3倍，

②传统CAPRI细胞培养方法允许采用加入培养液10％胎牛血清；

③传统CAPRI细胞培养方法加入细胞因子比较单一，且浓度比较低。

④传统CAPRI细胞培养方法没有上升到试剂盒高度，故不能产业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于培养链式激活的免疫细胞的试剂盒，从而弥补现有 技术的不足。

本发明首先提供一种高增殖力链式激活的免疫细胞试剂盒，包含有如下的组分：

1)A号液：所述的A号液为稀释液；

2)B号液：所述的B号液为分离液；

3)C号液：所述的C号液为洗涤液；

4)D号液：所述的D号液为培养液；

5)E号液为CAPRI体外处理试剂，其中包括Ⅰ液，为rhIL-2和IFN-γ的混合液；Ⅱ液 为rhIL-2、rhIL-15、rhIL-18和IFN-γ的混合液，

优选的，所述A号液为pH7.2～7.4的PBS释液液。

优选的，所述B号液为由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度为1.077±0.001的分层 液。

优选的，所述C号液为质量比0.9％生理盐水。

优选的，所述E号液中Ⅰ液为15000-25000U/mlrhIL-2和15000-25000U/mlIFN-γ 的培养液。

优选的，E号液中Ⅱ液为27000-35000U/mlrhIL-2、500-600ng/mlrhIL-15、7500- 12500U/mlrhIL-18和27000-35000U/mlIFN-γ的培养液。

本发明另一个方面还提供一种用于培养链式激活的免疫细胞的培养液，其组成包 括：氯化钾28-32mg/ml、氯化钙38-42mg/ml、硫酸镁11-13mg/ml、氯化钠48-52mg/ml、磷酸二 氢钾28-32mg/ml、碳酸氢钙11-12mg/ml、氨基酸13mg/ml、维生素21-22mg/ml、微量元素 0.93mg/ml、白蛋白43-47mg/ml、胰岛素7.8-8.2mg/ml、亚油酸0.38-0.42mg/ml、油酸4.8- 5.2mg/ml、谷胱甘肽2.3-2.7mg/ml、次黄嘌呤0.8mg/ml、硫辛酸0.1mg/ml、丙酮酸14.5- 15.5mg/ml、葡萄糖14.8-15mg/ml、胸腺嘧啶0.12mg/ml。

上述的培养液用于制备用于链式激活的免疫细胞培养的试剂盒；