[发明专利]一种制备低聚果糖的方法及其酶制剂有效
| 申请号： | 201610036660.4 | 申请日： | 2016-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN105441512B | 公开（公告）日： | 2019-02-19 |
| 发明（设计）人： | 王正祥;路福平 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12P19/18 | 分类号： | C12P19/18;C12P19/12;C12P19/04 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 栗华楠 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 制备 果糖 方法 及其 酶制剂 | ||
1.一种生产低聚果糖的方法，其特征在于，具体为：按蔗糖干重每Kg加入果糖基转移酶3000～12000U，将果糖基转移酶加入到质量体积比为2-110％的蔗糖溶液中，再按疏水溶剂与蔗糖溶液体积比为2-50％加入疏水溶剂，控制反应液在pH 3～8，温度在55～100℃，搅拌速度在50～200r/min的条件下反应4～24h；
所述疏水溶剂为由乙酸丁酯：环己烷：正庚烷按体积比1：1：1组成；
所述果糖基转移酶由fru3基因编码，所述fru3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的一种生产低聚果糖的方法，其特征在于，所述果糖基转移酶产自一株芽孢杆菌重组菌株，所述重组菌是通过将黑曲霉(Aspergillus niger)CBS 513.88来源的果糖基转移酶编码基因fru3基因在芽孢杆菌宿主细胞中进行表达获得，所述重组菌还包含能使果糖基转移酶基因fru3基因在芽孢杆菌中表达的启动子Pshuttle-09；所述fru3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.如权利要求2所述的一种生产低聚果糖的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌宿主细胞为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CBB3008，保藏编号CCTCC No.M 208236。
4.如权利要求2所述的一种生产低聚果糖的方法，其特征在于，所述启动子Pshuttle-09的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
5.如权利要求2所述的一种生产低聚果糖的方法，其特征在于，所述芽孢杆菌宿主细胞为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CBB3008，保藏编号CCTCC No.M 208236；所述启动子Pshuttle-09的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
所述重组菌发酵生产果糖基转移酶的方法如下：
发酵培养基质量体积比组成为：酵母膏2～4％，蛋白胨3.2～5.6％，葡萄糖10～30％，pH 4～8；
发酵温度42±1℃；发酵过程中维持溶氧为20％以上；发酵12h后，通过流加50％葡萄糖溶液，维持葡萄糖浓度为5～10g/L；发酵过程中用硫酸或氨水控制pH为4～8；发酵时间为150～180h。
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