[发明专利]一种基于唾液中的雌二醇的核酸适配体及检测用金标试纸条

权利要求书

1.一种检测雌二醇的金标试纸条，其特征在于，在塑料衬板上依次搭接样品玻璃纤维膜、核酸探针金标垫、硝酸纤维膜和吸水玻璃纤维膜，并且硝酸纤维膜上划有检测线和参照线，参照线靠近吸水玻璃纤维膜一端；其中核酸探针金标垫上附着表面经修饰的胶体金，检测线由核酸适配体A溶液划成，参照线由核酸适配体B溶液划成；

所述胶体金的表面经过活化了巯基的雌二醇的核酸适配体修饰，雌二醇的核酸适配体核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中序列5’端经过巯基修饰；

核酸适配体A溶液包括结合了链霉亲和素的互补探针A，与雌二醇的核酸适配体互补配对，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，其中序列5’端经过生物素修饰；

核酸适配体B溶液包括结合了链霉亲和素的互补探针B，与雌二醇的核酸适配体互补配对，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，其中序列5’端经过生物素修饰。

2.根据权利要求1所述的金标试纸条，其特征在于，所述胶体金的溶液的制备方法如下：

将醋酸缓冲液和TCEP溶液混合，再向其中加入雌二醇的核酸适配体，进行巯基活化反应，反应结束后向其中加入金纳米粒子溶液，震荡；再加入dATP，25℃震荡反应后静置30分钟，再在4℃下静置6小时；然后离心，沉淀用磷酸缓冲液溶解即得。

3.根据权利要求2所述的金标试纸条，其特征在于，所述醋酸缓冲液浓度为0.5M，pH值6.5，用量1μL；所述TCEP溶液的浓度为10mM，用量1.5μL；所述dATP浓度10μM，用量85μL；所述金纳米粒子粒径30～40nm，用量100μL；所述磷酸缓冲液浓度0.01M，pH值7.4，用量520μL。

4.根据权利要求1所述的金标试纸条，其特征在于，所述互补探针A溶液制备方法为：将40～80μL 1～10OD值的生物素修饰的互补探针A溶液和200～300μL 1～5mg/mL链霉亲和素溶液混合后在25℃下静置1小时，再向其中加入500～600μL 0.001～1.000M pH值6.0～8.0的磷酸盐缓冲溶液。

5.根据权利要求1所述的金标试纸条，其特征在于，所述互补探针B溶液制备方法为：将40～80μL 1～10OD值的生物素修饰的互补探针B溶液和 200～300μL 1～5mg/mL链霉亲和素溶液混合后在25℃下静置1小时，再向其中加入500～600μL 0.001～1.000M pH值6.0～8.0的磷酸盐缓冲溶液得到结合了链霉亲和素的生物素修饰的互补探针B溶液。

6.权利要求1～5任一所述的金标试纸条的制备方法，其特征在于，将样品玻璃纤维膜、核酸探针金标垫、硝酸纤维膜和吸水玻璃纤维膜依次粘贴到塑料衬板上，相邻两粘贴物之间的重叠部分长度为2mm，干燥封装，在4℃～25℃条件下保存。