[发明专利]一种基于唾液中的雌二醇的核酸适配体及检测用金标试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及激素检测技术领域，具体涉及一种基于唾液中的雌二醇的核酸适配体及检测用金标试纸条。

背景技术

雌二醇(17β-estradiol)属于内源性雌激素，分子量为272.38，在女性各种激素表达的生物活性中是最强的一种。随着对雌二醇的深入研究，发现内源性雌激素产生的代谢产物仍然能发挥各种各样的生物效应，正常情况下并不具有致癌作用。卵巢分泌雌激素，而且无排卵性功血、多囊卵巢综合征、功能性卵巢肿瘤等疾病可导致卵巢分泌雌激素增加，子宫内膜长期受单一雌激素刺激，无孕激素拮抗，可导致子宫内膜增生及癌变。

随着社会的发展，情绪疾病越来越受到社会的重视，而女性更易患各种情绪疾病，尤其是近几年经前焦虑性障碍的患病率明显提高，逐渐受到国内外妇科界的重视。经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)是指在月经周期的黄体期有规律、反复发作的一组症状集合，主要包括躯体和心理症状。经前期烦躁不安征(premenstrual dysphonic disorder,PMDD)是一种PMS严重状态，国外研究表明大约75％的妇女患PMS，而在患PMS者中又有14％患有PMDD。国内研究以乔明琦等为代表对PMS流行病学调查研究表明，该病的发生率占成年女性的41.9％。

女性生理期内，体内雌激素及孕酮的水平都有所变化，这两者与情绪变化相关。

对于体内雌二醇的水平变化的检测，具有非常重要的临床意义，然而传统的各种检测方法中一般都是基于尿液或者血液来检测，在取样的过程中给用户带来了不便或痛苦，且检测过程复杂，耗时长，成本高，并且不能保证批间的稳定性。

发明内容

由于雌二醇在唾液中性质较为稳定，并不影响测定效果，人体的唾液是通过口腔上皮细胞分泌，唾液中的雌二醇浓度与血液中的雌二醇浓度呈正相关性。又基于胶体金标记适配体识别雌二醇特异性抗原的技术避免了现有检测技术中的缺陷，具有稳定性高、易于合成等优点，因此，为了解决现有检测技术中的上述问题，本发明基于胶体金标记适配体识别雌二醇特异性抗原的技术原理，提供了一种雌二醇的核酸适配体，其相应的互补探针，以及由其组成的金标试纸条。

本发明提供的一种雌二醇的核酸适配体，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中序列5’端经过巯基修饰。该核酸适配体能够识别雌二醇并与其结合。

SEQ ID NO:15’-SH-TGTTCAATACGAAGGGATGCCGTTTGGGCCCAAGTTCGGCATAGTGTGGTGATAGTAAGAGCAATC-3’。

本发明提供的一种互补探针A，与上述雌二醇的核酸适配体互补配对，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，其中序列5’端经过生物素修饰。互补探针A与雌二醇竞争性结合上述核酸适配体。

SEQ ID NO:25’-biotin-GATTGCTCTTACTAT-3’。

本发明提供的一种互补探针B，与上述雌二醇的核酸适配体互补配对，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，其中序列5’端经过生物素修饰。互补探针B能够与上述核酸适配体的另外一部分结合，该部分不同于与雌二醇结合的序列段，也就是说，互补探针B与雌二醇之间没有竞争关系。

SEQ ID NO:35’-biotin-GATTGCTCTTACTATCACCACACTATGCCG-3’。

本发明公开的一种检测雌二醇的金标试纸条，是在塑料衬板上依次搭接样品玻璃纤维膜、核酸探针金标垫、硝酸纤维膜和吸水玻璃纤维膜，并且硝酸纤维膜上划有检测线和参照线，参照线靠近吸水玻璃纤维膜一端；其中核酸探针金标垫上附着表面经修饰的胶体金，检测线由核酸适配体A溶液划成，参照线由核酸适配体B溶液划成；

所述胶体金的表面经过活化了巯基的雌二醇的核酸适配体修饰；

核酸适配体A溶液包括结合了链霉亲和素的互补探针A；

核酸适配体B溶液包括结合了链霉亲和素的互补探针B。

以上金标试纸条，特别适合于唾液中雌二醇的检测。通过适配体检测唾液中的雌二醇浓度，利用唾液中微量的雌二醇浓度与血液中的雌二醇浓度存在显著相关性，从而推算出人体的雌二醇水平，为一种非侵入式检测方案，可用于监测女性的生理周期及健康状态。