[发明专利]棒曲霉素的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种棒曲霉素的检测方法，其特征是，该方法包括如下步骤：

（A）棒曲霉素核酸适体Apt与单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；

（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有棒曲霉素存在时，杂交链中Apt段选 择性地与棒曲霉素反应生成Apt-棒曲霉素，同时释放出单链信号探针ssDNA；

（C）消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶选择性地催 化双链DNA水解成单核苷酸，体系中单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；

（D）利用棒曲霉素核酸适体-棒曲霉素结合体不能诱导银离子还原成近红外荧光银纳 米簇，只有单链信号探针ssDNA能够诱导银离子还原生成强荧光的近红外银纳米簇的原理， 检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的真菌毒素棒曲霉素的含量。

2.根据权利要求1所述的棒曲霉素的检测方法，其特征是，所述棒曲霉素核酸适体为 5’-CAGCTCAGAAGCTTGATCCCGGCCCGCCAACCCGCATCATCTACACTGATATTTTACCTT GACTATCAGTCGTGC-3’。

3.根据权利要求1或2所述的棒曲霉素的检测方法，其特征是，所述的单链信号探针 ssDNA为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACGACTGATAGTC-3’。

4.一种检测棒曲霉素的试剂盒，其特征是，其至少包括：棒曲霉素核酸适体、单链信号 探针DNA、DNA扩增体系、外切酶、银离子还原检测体系。

5.根据权利要求4所述的检测棒曲霉素的试剂盒，其特征是，所述棒曲霉素核酸适体 为5’-CAGCTCAGAAGCTTGATCCCGGCCCGCCAACCCGCATCATCTACACTGATATTTTACCTT GACTATCAGTCGTGC-3’。

6.根据权利要求4所述的检测棒曲霉素的试剂盒，其特征是，所述的单链信号探针DNA 为5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACGACTGATAGTC-3’。

7.根据权利要求4所述的检测棒曲霉素的试剂盒，其特征是，所述DNA扩增体系包括缓 冲溶液,缓冲溶液由Tris-HCl、MgCl₂和(NH₄)₂SO₄组成，三磷酸脱氧单核苷酸混合溶液 dNTP和Phi29DNA聚合酶。

8.根据权利要求4所述的检测棒曲霉素的试剂盒，其特征是，所述核酸外切酶为Exo III核酸外切酶。

9.根据权利要求4所述的检测棒曲霉素的试剂盒，其特征是，所述的银离子还原检测体 系中的还原剂为抗坏血酸。