[发明专利]赭曲霉毒素A的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及纳米生物传感以及生物检测领域，具体地说，是提供一种赭曲霉毒素A 的快速检测方法及检测试剂盒。

背景技术

赭曲霉毒素包括7种结构类似的化合物，结构通式：R1=Cl或H；R2=H、CH3或C2H5。其 中赭曲霉毒素A(R1=C1，R2=H）毒性最大，在霉变谷物、饲料等最常见。

赭曲霉毒素A是曲霉和青霉等真菌产生的，广泛污染小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、 大米和黍类等粮食，也污染花生、蔬菜（豆类）。动物摄入了霉变的饲料后，这种毒素就可能 出现在其肉中。人类就会直接或间接地攫入赭曲霉毒素。赭曲霉毒素主要损害肝脏与肾脏， 也能引起肠黏膜炎症和坏死，并有致畸作用。因此对赭曲霉毒素A的检测是十分必要的。

目前，对赭曲霉毒素A检测方法主要是色谱技术，包括薄层色谱(TLC)，气相色谱 (GC)，高效液相色谱(HPLC)，液相色谱-质谱联用(LC-MS)等。近年来，发展了基于核酸适体 的真菌毒素新的检测方法。如BiosensorsandBioelectronics57(2014)226-231公开了 一种用于赭曲霉毒素A的检测的基于DNA骨架的银纳米簇的荧光适体传感器（A FluorescentAptasensorbasedonDNA-scaffoldedSilver-nanoclusterfor OchratoxinADetection）。

中国专利CN102830113B公开了一种目标诱导链释放和限制性内切酶酶切循环的 信号放大技术在赭曲霉素A超灵敏度检测中的应用。

中国专利CN102517288A公开了一种赭曲霉毒素A核酸适体及其应用，该核酸适体 可以用于赭曲霉毒素A的检测分析和分离富集。

通常，色谱法用于食品中痕量真菌检测存在灵敏度不够的问题，液-质联用法虽然 灵敏度高、快速，但设备昂贵、应具有专门操作技术人员才能进行检测，技术要求高，不宜大 众化和普及，而文献所述的基于核酸适体检测赭曲霉真菌毒素方法或存需要用到价格昂贵 的经标记（生物材料等）的DNA，或操作复杂等不足之处。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种检赭曲霉毒素A的方法。

本发明采用的技术方案：一种检赭曲霉毒素A的方法，该方法包括如下步骤：

（A）赭曲霉毒素A核酸适体（Apt）与单链信号探针DNA（ssDNA）杂交，形成杂交链；

（B）将待测样品溶液加入到该杂交链溶液，当待测样品中有赭曲霉毒素A时，杂交链选 择性地与赭曲霉毒素A反应释放出单链信号探针ssDNA；

（C）消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用核酸外切酶选择性 地催化双链DNA水解成单核苷酸，而单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；

（D）利用赭曲霉毒素A核酸适体-赭曲霉毒素A结合体不能诱导铜离子还原成近红外荧 光的铜纳米粒子，只有单链信号探针ssDNA能诱导铜离子还原成近红外荧光铜纳米粒子，在 铜离子还原检测体系中检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的赭曲霉毒素A的含量。

所述铜离子还原检测体系包括先后添加的铜离子和使铜离子还原成近红外荧光 铜纳米粒子的抗坏血酸还原剂。步骤（D）的检测，例如包括依次先后向体系中加入铜离子溶 液和抗坏血酸溶液，反应后生成近红外荧光铜纳米粒子。

所述赭曲霉毒素A核酸适体为

5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAC-3’。

所述可与赭曲霉毒素A核酸适体杂交的单链信号探针ssDNA为5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTCCCATGCTCC-3’。