[发明专利]病毒性出血性败血症病毒可视化核酸试纸条检测引物组和检测方法有效
| 申请号： | 201610043757.8 | 申请日： | 2016-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN105543413B | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 房保海;崔淑华;赵丽青;厉艳;赵鹏;刘鑫 | 申请（专利权）人： | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266002 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒性 血性 败血症 病毒 可视化 核酸 试纸 检测 引物 方法 | ||
1.病毒性出血性败血症病毒可视化核酸试纸条检测试剂盒，其特征在于，包括下列成分：
（1）2×RT-PCR Buffer 12.5μL；（2）PrimeScript 1 Step Enzyme Mix，1μL；（3） RNaseFree dH2O，8.5μL；（4）上游引物VHSV281-F和下游引物VHSV281-R，浓度都是10μM，各1μL；（5）模板1μL；
其中上游引物VHSV281-F和下游引物VHSV281-R的序列如下：
VHSV281-F：5’-FITC-CAGGCGTTGTCCGTGCTTCT-3’，5’端标记FITC；
VHSV281-R：5’-biotin-TCCCCGAGTTTCTTGGTGATGTA-3’，5’端标记biotin；
检测方法，包括以下步骤：
①RT-PCR扩增
提取VHSV总RNA，进行RT-PCR扩增，具体参数为：45℃ 10 min进行逆转录；95℃ 10 min热启动；然后进行35 次PCR循环，PCR循环条件：94℃ 30s, 55℃ 30s, 72℃ 30s；72 ℃7min；4℃保温；
②PCR产物试纸条检测试验
取5 μL扩增产物滴加在试纸条的样品垫上，同时滴加2～3滴缓冲液，10 min后观察质控线、检测线，判读出阴、阳性的结果；所述的缓冲液是RT-PCR产物检测试纸条配套的缓冲液；
在检测带区域出现明显红色条带为阳性，否则为阴性。
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