[发明专利]一种克隆酶供体片段及其制备方法有效
| 申请号： | 201610045629.7 | 申请日： | 2016-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN105524898B | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 邹炳德;邹继华;汪屹;贾江花 | 申请（专利权）人： | 美康生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州甬致专利代理事务所(普通合伙) 33228 | 代理人： | 沈春红 |
| 地址： | 315104 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 克隆 供体 片段 及其 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种克隆酶供体片段，其特征在于：该片段具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，该序列具有如下特征：
（1）SEQ ID NO:1序列具有三段相同的序列通过凝血酶酶切位点连接起来；
（2）该片段的分子量约为30KDa；
（3）每一个重复片段的分子量约为10KDa；
（4）每一个重复片段的N端含有6*His Tag标签，可用于亲和纯化；
（5）每一个重复片段均含有一个半胱氨酸残基，可利用该巯基偶联小分子化合物；
（6）每一个重复片段均含有一个赖氨酸残基，可利用该侧链的氨基偶联小分子化合物；
（7）用于偶联的半胱氨酸和赖氨酸均位于片段的N端，与ED的互补核心序列具有一定距离，进而不会明显影响到ED与EA的互补效率。
2.一种编码权利要求1所述的克隆酶供体片段的基因。
3.含有权利要求2所述的基因的载体。
4.用权利要求3的载体所转化的细胞。
5.一种克隆酶供体片段的制备方法，包括：（1）培养权利要求4所述的细胞；（2）利用诱导剂进行诱导表达蛋白；（3）收集菌体并破碎离心；（4）利用亲和纯化的方法进行纯化；（5）利用凝血酶将蛋白酶切成单个片段。
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