[发明专利]一种从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶的方法

说明书

【技术领域】

本发明属于酶分离技术领域。更具体地，本发明涉及一种从含植 物油的微生物发酵液中提取脂肪酶的方法。

【背景技术】

脂肪酶(又称三酰基甘油酯水解酶)是一类可催化三酰甘油酯及 其他水不溶性酯类的水解、酯化、转酯化等反应的酶类的总称；脂肪 酶可广泛地应用于食品、皮革制造、生物柴油、医疗医药和洗涤剂等 多个生产领域。许多动物、植物和微生物都可产脂肪酶，由于微生物 易于培养、产脂肪酶种类繁多，并可通过微生物育种手段提高脂肪酶 的产量，因此微生物产脂肪酶成为科研工作者的研究热点。

许多研究证实了油可作为产脂肪酶微生物的碳源及酶表达诱导 剂,这些诱导剂包括植物油(橄榄油、棕榈油等)和动物油脂(三酰甘 油、油酸等)。Gerardo等利用橄榄油或玉米油为碳源及诱导剂，在培 养基中添加吐温并在低通气条件下培养解脂亚罗酵母合成脂肪酶； Venkatesagowda等以提取椰子油后的糟粕为原料发酵Lasiddiplodia theobromaeVBE-1，发现椰子油可增强脂肪酶的活性；Patrick以橄榄 油作为Yarrowialipolytica培养的碳源，采用补料分批发酵所得酶活 比分批发酵提高了6倍，因此植物油或动物油的添加提高脂肪酶的活 性在许多微生物发酵生产脂肪酶的工艺中普遍存在。作为碳源或诱导 剂的油在微生物发酵脂肪酶的过程中发生乳化，使发酵液粘度增加， 同时在发酵体系中必须存在一定浓度的油脂为微生物提供维持能一 直到发酵结束；乳化油使发酵液粘度增加，难以通过离心、过滤等方 式除去发酵液中的杂质，因此乳化油的存在影响了后续酶的提取工艺 和干燥工艺。本发明基于此，发明了含油发酵液提取脂肪酶提的预处 理工艺。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种从含植物油的微生物发酵液中提取脂 肪酶的方法。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶的方 法。

该提取方法的步骤如下：

往含植物油的微生物发酵液中加入为发酵液体积35～50％的正丙 醇，搅拌均匀，接着采用离心分离法分离成固相、重相与轻相；所述 的固相与轻液弃去；

所述的重相转移到一种容器中，按照以克计载体重量与以毫升计 重相的比是7～10:100，往所述重相中加入玉米芯粉或花生壳粉载体， 同时加入磷酸钙pH调节剂以达到pH6.5～7.5，然后进行喷雾干燥， 得到脂肪酶粉末。

根据本发明的一种优选实施方式，所述的微生物发酵液是采用常 规发酵方法获得的解脂亚罗酵母含量为10⁶～10⁷CFU的发酵液。

根据本发明的另一种优选实施方式，在所述微生物发酵液中的脂 肪酶酶活性是5100U/ml以上。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的植物油是豆油、花生 油或菜籽油；所述植物油的含量是以微生物发酵液重量计0.1～1.0％。

根据本发明的另一种优选实施方式，从加入正丙醇起至离心分离 止的时间是小于1h。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述离心分离是在室温与离 心力6000g以上的条件下进行的。

根据本发明的另一种优选实施方式，在重相中的脂肪酶活性是所 述微生物发酵液活性的80～92％。

根据本发明的另一种优选实施方式，磷酸钙pH调节剂的添加量 是载体重量的30～45％。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述载体的粒度是60～80 目。

本发明涉及采用所述方法得到的脂肪酶。它的酶活性为 20400～25500U/g。

下面将更详细地描述本发明。

本发明涉及一种从含植物油的微生物发酵液中提取脂肪酶的方 法。

该提取方法的步骤如下：

往含植物油的微生物发酵液中加入为发酵液体积35～50％的正丙 醇，搅拌均匀，接着采用离心分离法分离成固相、重相与轻相；所述 的固相与轻液弃去。