[发明专利]一种木聚糖酶杂合酶工程菌株的构建方法有效
| 申请号： | 201610046663.6 | 申请日： | 2016-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN105505806B | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 周晨妍;刘振华;王燕;王拥涛;李同彪;朱新术 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/56;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 453003 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 构建 糖酶 引入 基因序列 酶工程 杂合酶 菌株 杂合 种木 芳香族氨基酸 耐热木聚糖酶 疏水性氨基酸 氨基酸替换 生物信息学 糖基化修饰 木聚糖酶 热稳定性 点突变 二硫键 同源性 氨基酸 比对 成木 多位 位点 替换 期望 | ||
【权利要求书】：
1.一种木聚糖酶杂合酶重组质粒的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
目的基因的合成及重组表达载体的构建
合成设计好的杂合酶基因xynZL序列；所述杂合酶基因xynZL序列如SEQ ID NO.1所示，编码193个氨基酸如SEQ ID NO.2所示；
参考杂合酶基因xynZL基因序列以及真核表达载体pPIC9K的多克隆位点，设计合成以下两条引物：YS：5’-CCGGAATTCTTCCCCACGACTCTGTCG-3’
YX：5’-ATAAGAATGCGGCCGCTTACTGAACACAGATGGACG-3’；
以xynZL基因为模板，YS、YX为引物进行PCR扩增，扩增产物回收后，与对应表达载体经双酶切、回收、连接，连接液转化E.coli DH5α感受态细胞，转化液分别涂布含Amp的LB平板，阳性克隆子筛选后，提取质粒经酶切及PCR验证，最终获得重组质粒pPIC9K-xynZL。
2.根据权利要求1所述的木聚糖酶杂合酶重组质粒的构建方法，其特征在于，所述进行PCR扩增的扩增条件均为：94℃预变性2min；94℃变性30s，67℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸10min。
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