[发明专利]用于高通量测序的DNA建库方法

权利要求书

1.用于高通量测序的DNA建库方法，包括以下步骤：

1)多重PCR

将分离纯化的DNA进行多重PCR扩增，反应体系为：

多重PCR反应条件为：99℃保持2min，然后进行23个循环，每个循环为99℃15s、60℃ 4min，然后保持在10℃；

2)引物部分裂解

将1μlFuPaReagent加入到PCR产物中混匀后，在PCR仪中依次按下述条件运行：50℃ 10min，55℃10min，60℃20min，然后保持在10℃；

3)接头的连接和纯化

向步骤2)得到的反应产物中加入2μl的7.5XSwitchSolution、1μl的Barcode Adapter、1μlDNALigase，在PCR仪中依次按下述条件运行：22℃30min，72℃10min，然后保 持在10℃；

向上述反应产物中加入22.5μlAgencourtAMPureXP混匀后室温孵育5min，置于磁力 架上，溶液澄清后弃尽上清，使用200μl新鲜的70％乙醇清洗磁珠两次，分别弃掉上清，短暂 离心后放回磁力架上，吸尽残余液体，室温干燥5分钟后，分别加入25μL的PlatinumPCR SuperMixHighFidelity和1μL的LibraryAmplificationPrimer，混匀后，重新放回磁力 架，待溶液澄清后，取上清；

4)扩增以及扩增后纯化

将步骤3)中获得的上清按照以下反应条件进行扩增：在98℃保持2min，然后进行7个循 环，每个循环为98℃15s、60℃1min，然后保持在10℃；

在扩增产物中加入30μlAgencourtAMPureXP，混匀，室温放置5min后，置于磁力架 上，直到溶液澄清后，弃掉上清，使用200μl新鲜的70％乙醇清洗磁珠两次，分别弃掉上清， 短暂离心后放回磁力架上，吸尽残余液体，室温干燥5分钟。

2.根据权利要求1的方法，进一步包括：将在上述步骤4)获得干燥产物中加入20μl的无 核酸水进行洗脱，混匀后将离心管放到磁力架上，溶液澄清后，取上清。

3.根据权利要求2的方法，使用所述上清进行文库浓度的测定以及质控。

4.根据权利要求1-3任一项的方法，其中所述DNA是cfDNA。

5.根据权利要求4的方法，其中所述cfDNA是血浆cfDNA。