[发明专利]一种检测藤壶幼虫早期附着程度的方法在审
申请号: | 201610047648.3 | 申请日: | 2016-01-25 |
公开(公告)号: | CN105506144A | 公开(公告)日: | 2016-04-20 |
发明(设计)人: | 高珊;孙源;张治洲 | 申请(专利权)人: | 哈尔滨工业大学(威海) |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人: | 赵瑶瑶 |
地址: | 264209*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 幼虫 早期 附着 程度 方法 | ||
1.一种检测藤壶幼虫早期附着程度的方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
⑴藤壶特异性引物的设计;
⑵污损早期,肉眼可见附着藤壶之前,海水污损样本的采集和基因组提取;
⑶利用藤壶特异性引物对上述基因组样本进行PCR扩增来测定藤壶幼虫的附着。
2.上述权利要求1中所述的方法,其特征在于:藤壶特异性引物设计方法如下:比较 主要海洋污损真核生物的18S核糖体基因序列,找出来藤壶的特异性单核苷酸多态性位点。 该位点作为引物的3’最末端位置使用。引物的3’倒数第二位的碱基设计原则是,它与靶 序列之间没有错配或形成一个错配(弱错配:A-C,T-G;或者是中等强度的错配:A-A,C-C, G-G),与非靶序列也形成一个错配(强错配:T-T,T-C,A-G;或者是中等强度的错配:A-A, C-C,G-G)。这样一来,引物与靶序列完全配对或只有一个3’倒数第二位的错配,一般不 影响扩增效果,而与非靶序列有两个3’最末端的连续两个错配,一般导致扩增失败。如此 可以获得藤壶特异性引物。
3.依据上述权利要求1所述的所述的方法,其特征在于藤壶特异性引物之一为AmpR1: 5’-ATGCTTTCGCAGTAGTTCGTTG-3’,该引物与通用引物F566:5’-GGCATCACAGACCTG TTATTGC-3’一起使用可以完成早期污损样品中藤壶幼虫存在与否的测定判断。
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