[发明专利]一种检测藤壶幼虫早期附着程度的方法在审

专利信息
申请号: 201610047648.3 申请日: 2016-01-25
公开(公告)号: CN105506144A 公开(公告)日: 2016-04-20
发明(设计)人: 高珊;孙源;张治洲 申请(专利权)人: 哈尔滨工业大学(威海)
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 代理人: 赵瑶瑶
地址: 264209*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 幼虫 早期 附着 程度 方法
【权利要求书】:

1.一种检测藤壶幼虫早期附着程度的方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:

⑴藤壶特异性引物的设计;

⑵污损早期,肉眼可见附着藤壶之前,海水污损样本的采集和基因组提取;

⑶利用藤壶特异性引物对上述基因组样本进行PCR扩增来测定藤壶幼虫的附着。

2.上述权利要求1中所述的方法,其特征在于:藤壶特异性引物设计方法如下:比较 主要海洋污损真核生物的18S核糖体基因序列,找出来藤壶的特异性单核苷酸多态性位点。 该位点作为引物的3’最末端位置使用。引物的3’倒数第二位的碱基设计原则是,它与靶 序列之间没有错配或形成一个错配(弱错配:A-C,T-G;或者是中等强度的错配:A-A,C-C, G-G),与非靶序列也形成一个错配(强错配:T-T,T-C,A-G;或者是中等强度的错配:A-A, C-C,G-G)。这样一来,引物与靶序列完全配对或只有一个3’倒数第二位的错配,一般不 影响扩增效果,而与非靶序列有两个3’最末端的连续两个错配,一般导致扩增失败。如此 可以获得藤壶特异性引物。

3.依据上述权利要求1所述的所述的方法,其特征在于藤壶特异性引物之一为AmpR1: 5’-ATGCTTTCGCAGTAGTTCGTTG-3’,该引物与通用引物F566:5’-GGCATCACAGACCTG TTATTGC-3’一起使用可以完成早期污损样品中藤壶幼虫存在与否的测定判断。

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