[发明专利]has-miR-29b-3p的检测

权利要求书

1.一种检测has-miR-29b-3p的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于特异性扩增 has-miR-29b-3p的特异性引物对，所述引物为具有SEQIDNo：1的连续核苷酸序列和具有 SEQIDNo：2的连续核苷酸序列；

所述试剂盒中还包括RNA逆转录引物，其序列为SEQIDNo：3。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括与引物序列构成PCR 反应体系的Pfu缓冲液、dNTPs、MgSO₄、PfuDNA聚合酶、模板DNA、荧光染料；所述PCR反应体 系的终浓度组成为：

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光染料可选自DNA饱和性染料包 括EvaGreen染料、PLUS染料、ResoLight染料、SYTO9染料、SYBRgreen染料；所 述dNTP混合液包括10mMdATP、10mMdCTP、10mMdTTP、10mMdGTP的混合液。

4.一种权利要求1所述的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

(1)血清总RNA的提取：包括取血样离心后，取上清，加入TRIzolLSReagent试剂和冰 醋酸，剧烈振荡混匀进行匀浆；孵育后加入氯仿抽提，取水相加入异丙醇沉淀RNA，离心沉淀 RNA，去除上清液后加入乙醇清洗沉淀RNA，最后空气干燥，加入无RNA酶的水溶解RNA备用；

(2)逆转录：在SEQIDNo：3的反转录酶的作用下及RNA酶抑制剂存在的条件下反应，反 应条件16℃30min,42℃40min,85℃5min,最后在冰上待用或-20℃保存；

(3)荧光定量PCR(RT-PCR):使用SEQIDNo：1的引物和SEQIDNo：2的引物进行荧光定 量PCR反应，

(4)建立标准曲线，按绝对定量方法对结果进行分析。