[发明专利]一种Cerrena来源的漆酶的高效表达方法

权利要求书

1.一种毕赤酵母基因工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母基因工程菌表达核苷酸序列如 SEQIDNO.1的漆酶。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以P.pichiaGS115 为宿主构建得到的。

3.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以pPIC9K为表 达载体构建得到的。

4.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌的构建方法：(1) 化学合成法合成SEQIDNO.1所示的基因片段；(2)将基因片段连接到pPIC9K上得到重组 载体pPIC9K-Lcc3’；(3)将重组载体线形化后电转入P.pichiaGS115，筛选阳性克隆并验证， 即得到毕赤酵母基因工程菌。

5.一种发酵生产生产漆酶的方法，其特征在于，所述方法将权利要求1-4任一所述的基 因工程菌在BMGY培养基中，于温度30℃、转速220rpm下培养至OD2～6，离心收集菌体， 重悬于BMMY培养基中，在温度30℃、转速220rpm下培养，添加甲醇和Cu²⁺诱导表达， 发酵上清即含有漆酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述甲醇的添加方式为每24h添加0.5％ 的甲醇。

7.一种表达Cerrena来源的漆酶的方法，其特征在于，所述方法是将核苷酸序列如SEQ IDNO.1的漆酶在毕赤酵母菌中进行表达。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法具体是：将核苷酸序列如SEQID NO.1的漆酶基因克隆到表达载体pPIC9K上得到重组载体，然后再转化到毕赤酵母P.pichia GS115中进行表达。

9.权利要求1-4任一所述基因工程菌生产得到的漆酶。

10.权利要求9所述漆酶在纺织、化学、生物或环境领域的应用。