[发明专利]黄颡鱼Cyp24a1基因及其获得全长序列的方法

说明书

本发明公开了一种黄颡鱼Cyp24a1基因及其获得全长序列的方法，Cyp24a1序列的全长为2180bp，编码506个氨基酸。黄颡鱼Cyp24a1蛋白的分子式为C₂₆₀₂H₄₁₁₂N₇₀₄O₇₄₀S₂₆，分子量大小为57.93kDa，等电点为8.82，总平均疏水指数为‑0.351。对黄颡鱼Cyp24a1蛋白结构和功能预测分析,Cyp24a1蛋白没有信号肽序列，并且也没有跨膜结构域。在NCBI上比对黄颡鱼Cyp24a1蛋白发现与斑点叉尾鮰和斑马鱼的同源性分别达到94％和74％。Cyp24a1基因在肝脏中表达最高，在肌肉和肠中微量表达。本发明利用RACE技术填补了该基因在黄颡鱼上的空白，为进一步研究该基因在鱼类上的功能奠定了基础。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地指一种黄颡鱼Cyp24a1基因及其获得全长序列的方法。

背景技术

维生素D属于固醇类衍生物，具有抗佝偻病的作用，是动物必需的一种维生素。鱼体不能合成维生素D而必须由食物供给。由于鱼体对维生素D₃的利用率高于维生素D₂，所以维生素D₃是鱼体中维生素D的主要贮存形式。维生素D₃经鱼体的肠的吸收后，被乳糜微粒经血液运送至肝脏。在肝脏中，维生素D₃在25位羟基化形成25-羟基维生素D₃[25(OH)D₃]。25(OH)D₃随后在25-羟基维生素D₃-1α-羟化酶(CYP24A1)的催化下转变为具有生物活性的1α,25-二羟维生素D₃[1α,25(OH)₂D₃]。

一些体内研究已经表明，维生素D₃最活跃的代谢物1α,25(OH)₂D₃可以减弱上皮细胞的增殖作用、促进大肠癌细胞的分化和凋亡，并且还具有降低肿瘤浸润程度、抑制肿瘤细胞转移和远处迁移等一系列的抗癌作用。Cyp24a1基因编码抑制维生素D₃代谢活化的酶25-羟基维生素D₃-24-羟化酶(CYP24A1)，该酶能将1α,25(OH)₂D₃转换成失活形式的维生素D₃-23-羧酸，减少1α,25(OH)₂D₃的生成，降低其发挥生物学功能。然而，Cyp24a1基因在鱼类上的研究还较为缺乏。

发明内容

本发明的目的提供了一种黄颡鱼Cyp24a1基因及其获得全长序列的方法。黄颡鱼Cyp24a1基因填补了该基因在黄颡鱼上的空白，为进一步研究黄颡鱼的该基因奠定了分子基础。

为实现上述目的，本发明提供的一种黄颡鱼Cyp24a1蛋白，所述黄颡鱼Cyp24a1的氨基酸序列为：

(1)由SEQ ID No.3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(2)与序列SEQ ID No.3限定的氨基酸序列同源性在90～100％编码相同功能蛋白质的氨基酸序列；

(3)SEQ ID No.3所示的氨基酸序列中密码子的第三个碱基替换的一个或多个氨基酸且具有同等活性的由(1)衍生的蛋白。

此外，应当理解，鉴于密码子兼并性及物种具有密码子偏好性的特点，本领域技术人员，可以根据需要使用适合特定物种表达的密码子。

进一步地，所述黄颡鱼Cyp24a1蛋白的分子式为C₂₆₀₂H₄₁₁₂N₇₀₄O₇₄₀S₂₆，分子量大小为57.93kDa，等电点为8.82，总平均疏水指数为-0.351。